[发明专利]蛋白糖基化

权利要求书

1.一种蛋白糖基化的方法，其中所述方法包括以下步骤：

i)修饰蛋白以包括炔基和/或叠氮基；和

ii)在Cu(I)催化剂存在条件下，将(i)中修饰的蛋白与

(a)修饰的包括叠氮基的糖基；和/或

(b)修饰的包括炔基的糖基

反应。

2.权利要求1所述的方法，其中蛋白修饰涉及用一个或多个非天然氨基酸类似物取代蛋白的一个或多个氨基酸。

3.权利要求2所述的方法，其中非天然氨基酸类似物是甲硫氨酸类似物。

4.权利要求3所述的方法，其中甲硫氨酸类似物是高炔丙基甘氨酸或者叠氮基高丙氨酸。

5.权利要求1所述的方法，其中蛋白包括多于10个氨基酸。

6.权利要求5所述的方法，其中蛋白包括10到1000个氨基酸。

7.权利要求1所述的方法，其中蛋白分子量大于10kDa。

8.权利要求7所述的方法，其中蛋白分子量在10到100kDa之间。

9.权利要求1到4中任意一项所述的方法，其中蛋白选自糖蛋白，血液蛋白，激素，酶，受体，抗体，白介素和干扰素。

10.权利要求9所述的方法，其中蛋白是激素。

11.权利要求10所述的方法，其中激素是红细胞生成素。

12.前述权利要求中任意一项所述的方法，其中蛋白修饰(步骤i)还包括修饰蛋白以包括硫醇基的步骤。

13.权利要求12所述的方法，其中通过在蛋白的氨基酸序列中插入半胱氨酸残基而引入硫醇基。

14.一种蛋白糖基化的方法，所述方法包括以下步骤：

i)(a)修饰蛋白以包括炔基和/或叠氮基；和

(b)在(a)中的蛋白修饰之前或者之后，任选修饰蛋白以包括硫醇基；和

ii)在与硫醇-选择性的糖类试剂(d)反应之前或者之后，在Cu(I)催化剂存在条件下，将(i)中修饰的蛋白与糖基(c)顺序反应

(c)修饰以包括叠氮基的糖基，和/或修饰以包括炔基的糖基；和

(d)硫醇-选择性的糖类试剂。

15.权利要求14所述的方法，其中硫醇-选择性糖类试剂是与蛋白中的硫醇基反应以通过二硫键引入与蛋白连接的糖基残基的试剂。

16.权利要求15所述的方法，其中硫醇选择性糖类试剂是糖基磺酰硫代试剂。

17.权利要求16所述的方法，其中糖基磺酰硫代试剂是糖基甲磺酰硫代试剂。

18.权利要求15所述的方法，其中硫醇-选择性糖类试剂是糖基硫化硒基试剂。

19.前述权利要求中任意一项所述的方法，其中Cu(I)催化剂选自CuBr和CuI。

20.权利要求19所述的方法，其中Cu(I)催化剂是Cu(I)Br。

21.权利要求19或者20所述的方法，其中Cu(I)催化剂在起稳定作用的胺配体存在的条件下提供。

22.权利要求21所述的方法，其中配体是三三唑基胺配体。

23.化学式(III)所示的蛋白

其中a和b是0到5之间的整数；p和q是1到5之间的整数。

24.按照权利要求1到22中任意一项的方法糖基化的蛋白。

25.化学式(IV)所示的糖基化蛋白

其中t是1到5之间的整数；而隔离物，它可以是不存在的，是具有1到8个C原子的脂肪族部分。

26.权利要求25所述的糖基化蛋白，其中间隔物选自C_1-6烷基和C_1-6杂烷基。

27.权利要求26所述的糖基化蛋白，其中间隔物选自甲基、乙基和CH₂(X)_y，其中X是O、N或者S，y是0或者1。