[发明专利]通过自动化的蛋白质错折叠循环扩增超灵敏检测朊病毒

权利要求书

1.检测样品中朊病毒的方法，其包括：

(a)将样品与非病原性蛋白质混合以制备反应混合物；

(b)进行初步扩增，其包括：

(i)温育反应混合物；

(ii)破坏反应混合物；

(iii)重复步骤(i)和(ii)一次或多次；

(c)进行连续扩增，其包括：

(i)除去一部分反应混合物并将它与额外的非病原性蛋白质一起温育；

(d)使用测定方法检测反应混合物中的朊病毒。

2.权利要求1的方法，其中所述朊病毒包括哺乳动物PrP。

3.权利要求1的方法，其中所述非病原性蛋白质包含可检测的标记。

4.权利要求1的方法，其还包括在约25到50℃下温育样品。

5.权利要求1的方法，其还包括温育样品约1分钟到约10小时。

6.权利要求1的方法，其中通过超声处理来破坏样品。

7.权利要求6的方法，其中超声波仪对于自动化操作来说是可编程的。

8.权利要求6的方法，其中样品不直接接触超声波仪。

9.权利要求1的方法，其中将样品密封以防止蒸发。

10.权利要求1的方法，其中重复步骤(b)(i)和(b)(ii)1到200次。

11.权利要求1的方法，其中反应混合物还包含金属螯合剂。

12.权利要求11的方法，金属螯合剂是EDTA。

13.权利要求1的方法，其中非病原性蛋白质来自细胞裂解物。

14.权利要求13的方法，其中细胞裂解物来自过表达PrP的细胞。

15.权利要求13的方法，其中细胞裂解物来自表达突变体或者经标记的PrP的细胞。

16.权利要求13的方法，其中细胞裂解物是脑匀浆。

17.权利要求13的方法，其中脑匀浆物是哺乳动物脑匀浆物。

18.权利要求13的方法，其中脑匀浆物的来源是与样品来源相同的物种。

19.权利要求1的方法，其中在约3天的时间内进行步骤(b)。

20.权利要求1的方法，其中所述样品是来自动物的组织样品。

21.权利要求20的方法，其中所述组织样品来自脑。

22.权利要求20的方法，其中所述样品来自外周器官。

23.权利要求22的方法，其中所述外周器官是血液、扁桃体、脾脏或者其他淋巴器官。

24.权利要求1的方法，其中检测朊病毒的测定方法是蛋白质印迹、动物生物测定方法、ELISA或者CDI、细胞感染性测定方法或者光谱测定方法。

25.权利要求24的方法，其中ELISA测定方法是两位点免疫测定夹心ELISA。

26.检测样品中朊病毒的方法，其包括：

(a)将样品与非病原性蛋白质混合以制备反应混合物；

(b)进行初步扩增，其包括：

(i)温育反应混合物；

(ii)破坏反应混合物；

(iii)重复步骤(i)和(ii)一次或多次；

(c)进行连续扩增，其包括：

(i)除去一部分反应混合物并将它与额外的非病原性蛋白质温育；

(ii)重复步骤(b)；

(d)使用测定方法检测反应混合物中的朊病毒。

27.权利要求26的方法，其还包括重复步骤(c)一次或多次。

28.权利要求27的方法，其中可以在含有2×10⁵个或者更少朊病毒分子的样品中检测到朊病毒。

29.权利要求27的方法，其还包括失活残留的朊病毒。

30.诊断动物中疾病的方法，其包括通过权利要求1的方法检测来自动物的样品中朊病毒的存在。

31.权利要求30的方法，其中所述动物是死亡的。