[发明专利]一种融合蛋白的组成及其分离方法

说明书

技术领域

[0001]本发明涉及一种融合蛋白的组成及其分离方法。

背景技术

[0002]使用融合蛋白的表达系统生产重组蛋白是一种广为接受的技术。在该系统中，融合伴侣有助于所需蛋白的表达和纯化。融合伴侣常用于提供一个可以帮助融合蛋白进行后续纯化的“标签”。然而，为了使所需蛋白恢复其自然形态或药学上可接受的形态，该融合伴侣必须在融合蛋白分离后立即去除。去除融合伴侣最广为使用的方法是使用特异性裂解酶，如凝血酶，Xa因子或肠激酶(Wassenberg等，Protein Sci＜5：1718(1997)；Schlumpberger等，ProteinSci 9：440(2000)；Zaitseva等，Protein Sci 5：1100(1996))。它包括在所需蛋白和融合伴侣之间插入一段能被裂解酶特异性裂解的特定氨基酸序列。所需的蛋白可通过采用裂解酶(如凝血酶)裂解融合蛋白进行恢复。

[0003]凝血酶是一种可以断裂使用丝氨酸的多肽键的胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶。许多研究者研究了凝血酶的特异性。已知的凝血酶裂解位点如下(Chang，Eur.J.Biochem.151：211(1985)；GST genefusion system handbook，Amersham Biosciences，Edition AA，p.88-89)。

1)P4-P3-Pro-Arg/Lys↓P1’-P2’，其中P3和P4是疏水氨基酸，P1’和P2’是非酸性氨基酸。Arg/Lys↓P1’键被断裂。

范例：

  P4  P3  Pro  Arg/Lys  P1’  P2’  A  Leu  Val  Pro  Arg  Gly  Ser  B  Met  Tyr  Pro  Arg  Gly  Asn  C  Ile  Arg  Pro  Lys  Leu  Lys

(SEQ ID NOS：1-3)