[发明专利]嵌合的人甜味-鲜味和鲜味-甜味受体

说明书

发明领域

本发明涉及新的嵌合的人和啮鼠动物的味觉受体多肽、编码核酸 序列、表达这些嵌合味觉受体多肽的细胞，以及它们在鉴定味觉调节 剂，尤其是甜味和鲜味调节剂中的用途。

发明背景

人T1R家族味觉受体包括hT1R1、2和3。T1R属于C类G-蛋白偶 联受体，并且每种C类GPCR由一个大的N端胞外结构域和一个C端7 跨膜结构域组成。已经普遍知道hT1R1和hT1R3形成了调节鲜味转导 的异聚受体(heteromeric receptor)并且其识别鲜味促味剂 (tastant)，而hT1R2和hT1R3形成调节甜味转导的异聚受体并且其 识别甜味促味剂。因此已知鲜味受体(hT1R1/hT1R3)和甜味受体 (hT1R2/hT1R3)均具有相同的亚基hT1R3。

本发明的简述和目标

本发明的一个目标是产生嵌合味觉受体多肽，其响应鲜味和/或甜 味刺激和/或增强由其它化合物引起的鲜味和甜味(umami and/or sweet)。

本发明的另一个目标是在测定法中使用这种嵌合味觉受体多肽， 用于鉴定本身调节甜味或鲜味和/或增强由其它化合物引起的鲜味和 甜味的化合物。

更特别地，本发明的一个目标是通过组合T1R1和T1R2味觉受体 基因的部分而产生编码嵌合味觉受体的DNA融合体，并且与相同或不 同物种的T1R3味觉受体共表达而产生响应甜味和/或鲜味刺激或增强 由其它化合物引起的鲜味和甜味的嵌合味觉受体。

更特别地，本发明的一个目标是产生嵌合味觉受体，其通过这样 产生：将T1R1多肽，或编码DNA，优选hT1R1或mT1R1或rT1R1的胞 外结构域的全部或部分与T1R2多肽或编码DNA，优选hT1R2、rT1R2 或mT1R2或其部分的跨膜结构域的全部或部分组合，而产生鲜味-甜味 嵌合味觉受体多肽或编码DNA。

而且更特别地，本发明的一个目标是产生嵌合味觉受体，其通过 这样产生：将T1R2多肽或编码DNA，优选hT1R2、rT1R2或mT1R2的 胞外结构域的全部或部分与T1R1多肽或编码DNA，优选hT1R1或mT1R1 或rT1R1的跨膜结构域的全部或部分组合，而以产生嵌合的甜味-鲜味 受体多肽或编码DNA。

本发明的另一个目标是提供包含于SEQ ID NO：1-4中的特异性 hT1R1-2和hT1R2-1核酸序列和多肽序列。

本发明的另一个目标是在合适的宿主细胞中，优选HEK-293细胞 中表达这些编码嵌合味觉受体的核酸序列，其另外优选表达G蛋白和 T1R3核酸序列。

本发明的另一个目标是在测定法中使用这些细胞，用于鉴定调节 甜味或鲜味的分子，例如鲜味和甜味味觉配体以及鲜味和甜味增强剂。

附图简述

图1包含了称为hT1R2-1的根据本发明的嵌合的甜味-鲜味受体的 核酸序列(SEQ ID NO：1)，所述hT1R2-1包含与人T1R1的跨膜结构 域融合的人T1R2的胞外结构域。

图2包含了称为hT1R2-1的根据本发明的嵌合的甜味-鲜味受体的 多肽序列(SEQ ID NO：2)，所述hT1R2-1包含人T1R2的细胞外部分 和人T1R1的跨膜部分。

图3包含了称为hT1R1-2的根据本发明的嵌合味觉受体的核酸序 列(SEQ ID NO：3)，所述hT1R1-2包含hT1R1的胞外结构域和hT1R2 的跨膜结构域。

图4包含称为hT1R1-2的根据本发明的嵌合受体的多肽序列(SEQ ID NO：4)，并包含本发明中使用的嵌合的G蛋白G16gust44的蛋白质 序列(SEQ ID NO：5)，嵌合的G蛋白G16gust44含有融合至味导素 (gustducin)的44羧基端氨基酸的Gα16的N-端部分。

图5包含了天然的T1R2/T13、T1R1/T1R3，以及嵌合的甜味-鲜味 hT1R2-1/T1R3和嵌合的鲜味-甜味hT1R1-2/T1R3的示意图。