[发明专利]用于检测脑病的方法

说明书

本发明主要涉及一种用于增强细胞朊病毒蛋白PrP^c的PrP^Sc亚型的低聚和/或感染性滴度的方法。本发明还涉及所述方法在脑病，尤其是包括牛海绵状脑病(BSEs)的可传播性亚急性海绵状脑病(TSSEs)的诊断、表征、临床监测等方面的应用。

朊病毒病或者可传播性亚急性海绵状脑病(TSSEs)是影响人类和动物的致死性神经退行性症状。TSSEs基本上包括人类的克-雅病(Creutzfeldt-JakobDisease，CJD)，绵羊和山羊的羊搔痒症和牛的牛海绵状脑病(BSE)。其它脑病已经被证明存在于猫科动物、貂或者某些野生动物如鹿或驼鹿中。

造成这些疾病的传染性病原体是非传统性的。目前，主要的假说是“朊病毒”，根据该假说，由宿主生物体所合成的细胞朊病毒蛋白PrP^c能够采用被称作PrP^Sc的病理构象，其表示“羊搔痒症”亚型。

上述两种亚型具有相同的氨基酸序列，但是二级结构不同：PrP^Sc具有明显较高含量的β-折叠片层，而正常PrP(PrP^C)具有较多的α-螺旋。

两种生化特性通常使得可以区分上述两种亚型：

-PrP^Sc对蛋白酶有部分抗性，尤其是对蛋白酶K(PK)，所述蛋白酶产生其N-末端切割。PK作用以后，PrP^Sc通常由于双糖基化型的表观分子量被称作PrP27-30：通常认为常见菌株的PrP^Sc切割位点位于89和90氨基酸之间(Prusiner S.B.等，Cell，(1984)，38，127-134)，

-PrP^Sc不溶于非离子洗涤剂，例如Triton X100或Triton 114。

原则上，正常形式的朊病毒蛋白(PrP^C)被蛋白酶完全降解并且在存在非离子洗涤剂时完全溶解。

PrP^Sc在罹患TSSE的人或动物脑中的积累造成脑的退化。由于在欧洲的疯牛病危机和克-雅病出现在人类中的新变种(vCJD)，对这些疾病的研究显示出研发上的显著增加。结果是对于这些非传统性的传染性病原体的理解获得了进展。然而，目前还不存在用于治疗罹患CJD的患者的治疗方法，也没有用于早期诊断的检测。

在过去这十多年来，已经鉴定了一些具有“抗-朊病毒”活性以及创新的化学结构的分子，例如(i)树枝状大分子(dendrimers)(Supattapone S.等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1999)96，14529-34)；(ii)卟啉和酞菁的衍生物(Caughey W.S.等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1998)21，12117-22)；(iii)阿的平的衍生物和氯丙嗪的衍生物(Doh-Ura等，J Virol(2000)74，4894-7)，(Korth C等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(2001)98，9836-41)。这些药物能够部分或者全部地消除慢性朊病毒感染的ScN2a小鼠神经母细胞瘤的传染性。然而，其在体内的作用非常有限(Demaimay R等，J Gen.Virol(1994)75，2499-503；Priola SA等，Science(2000)287，1503-6)。这些产品在体内缺乏有效性的原因可能是因为对这些药物的作用机制所知不多或者根本不知道，所以其对于感染性病原体缺乏特异性，以及这些产品在穿过血脑屏障时有困难。

为了鉴定“抗-朊病毒”产品所进行的药物筛选研究也导致鉴定出两种化合物，即2-氨基-6-[(2-氨基苯基)硫]-4-(2-呋喃基)吡啶-3，5-二腈和N’-1-({5-[(4，5-二氯-1H-咪唑-1-基)甲基]-2-呋喃基}羰基)-4-甲氧基苯-1-磺酰肼，其在细胞培养物中表现出抑制活性(Perrier V.等，Proc.Natl.Acad.Sc.U.S.A.(2000)97，6073-6078)。然而，所获得的这些产品的IC₅₀值(细胞中PrP^Sc含量的50％被抑制的浓度)达到15μM的数量，并未被发现适合于体内应用。而且，Etessami等(Biochem.Biophys.Res.Comm.，2005，330：5)也观察到核苷酸释放到破损细胞的细胞外培养基中易于减少朊病毒的从头感染。