[发明专利]糖基化的IL－7，制备及应用

权利要求书

1.纯化的哺乳动物超糖基化IL-7多肽，其中该超糖基化的IL-7多肽含有至少3个N-糖基化氨基酸残基。

2.超糖基化的IL-7组合物，其中该组合物含有至少80％的在至少3个不同的氨基酸残基上被N-糖基化的IL-7多肽。

3.权利要求2中的组合物，其中该组合物含有80％到95％之间的在至少3个不同的氨基酸残基上被N-糖基化的IL-7多肽。

4.权利要求2或3中的超糖基化的IL-7组合物，含有至少80％的IL-7多肽，该多肽在3个到最多达8个不同的氨基酸残基上被糖基化、包括1个O-和最多达7个N-糖基化位点。

5.权利要求4中的组合物，其中该组合物含有80％到95％之间的IL-7多肽，该多肽在3个到最多达8个不同的氨基酸残基上被糖基化、包括1个O-和最多达7个N-糖基化位点。

6.权利要求2到5任何一个中的超糖基化IL-7组合物，其中的IL-7多肽是人类IL-7多肽。

7.权利要求2到6任何一个中的超糖基化IL-7组合物，其中的糖基化位点是在IL-7多肽序列中天然存在和/或人工产生的。

8.权利要求2到7任何一个中的超糖基化IL-7组合物，其中的IL-7多肽是人类IL-7多肽，以及其中的糖基化位点选自70、91和116位的Asn残基，110位的Thr，以及表1中和优选在表2中列出的任何人工产生的糖基化位点，或其组合。

9.权利要求2到7任何一个中的超糖基化IL-7组合物，其中该IL-7多肽含有或富集选自下面的N-连接的糖链：

a)哺乳动物类型的糖链，优选为CHO细胞表达的类型；

b)含有复杂的N-糖链(例如三天线或二天线结构)、更优选含有大量甘露糖和乙酰葡萄糖胺分子和大量末端唾液酸残基的糖链；

c)被α-2，6-唾液酸转移酶或α-2，3-唾液酸转移酶唾液酸化的糖链；和/或

d)显示出3到30个、优选7到23个唾液酸基-N-乙酰半乳糖胺的唾液酸化的糖链。

10.权利要求9中的超糖基化的IL-7组合物，其中该IL-7多肽还含有或还富集具有末端唾液酸残基的O-连接的糖链。

11.权利要求9中的超糖基化的IL-7组合物，其中的糖链含有带有部分或完全末端唾液酸化的四天线到二天线结构，更优选含有三或二唾液酸化的三天线结构，和/或带有二唾液酸化的二天线结构。

12.权利要求2到11任何一个中的超糖基化IL-7组合物，其中该IL-7多肽的平均等电点低于6.5，用质谱分析确定的平均表观分子量大于25KDa，或用SDS凝胶电泳确定的平均分子量大于27KDa.

13.权利要求2到12任何一个中的超糖基化IL-7组合物，其中该IL-7超糖基化多肽显示在哺乳动物宿主中延长的体内半衰期和平均存留时间。

14.具有修饰的氨基酸序列的IL-7多肽，其中该序列含有至少1个人工产生的糖基化位点。

15.权利要求14中的多肽，其中该多肽含有1、2、3或4个，更优选1、2或3个，甚至更优选1或2个人工产生的糖基化位点。

16.权利要求14或15中的多肽，其中该多肽含有的人类IL-7多肽的序列含有选自下面的一个或几个氨基酸修饰：Lys28Asn-Ile30Ser-Ile30Thr-Ile30Asn-Ser32Thr-Leu35Ser-Leu35Thr-Glu38Ser-Glu38Thr-Phe39Ser-Phe39Thr-Phe42Ser-Phe42Thr-Glu52Ser-Glu52Thr-Val82Asn-Glu84Thr-Glu84Ser-Lys97Asn-Arg99Thr-Arg99Ser-Ala102Asn-Leu104Thr-Leu104Ser-Leu104Asn-Glu106Thr-Glu106Ser-Leu128Ser-Leu128Thr-Ile145Asn-Met147Thr-Met147Ser-Met147Asn-Thr149Ser，或者含有至少5个氨基酸残基，典型至少8、9、10、11、12或15个残基的其不同的片段。