[发明专利]检测生存力相关分子的改进方法

权利要求书

1.一种检测样品中与一种或多种细胞或生物的生存力相关的分子的方法，其包括以下步骤：

a)使所述样品与酶接触，该酶仅在所述与该一种或多种细胞或生物生存力相关的分子存在下能够在核酸分子中添加或去除化学部分，由此产生新的可检测核酸分子；和

b)通过检测仅在所述与该一种或多种细胞或生物生存力相关的分子存在下产生的新核酸分子来检测所述与一种或多种细胞或生物生存力相关的分子的存在情况。

2.根据权利要求1的方法，其中通过连接形成所述新核酸分子。

3.根据权利要求2的方法，其中通过将所述核酸分子与另外的核酸分子连接而产生所述新核酸分子。

4.根据权利要求2或3的方法，其中所述酶包括连接酶。

5.根据权利要求4的方法，其中所述连接酶包括T4DNA连接酶或T4RNA连接酶。

6.根据权利要求1-5中任一项的方法，其中所述与一种或多种细胞或生物的生存力相关的分子包括ATP。

7.根据权利要求4的方法，其中所述连接酶包括大肠杆菌DNA连接酶。

8.根据权利要求7的方法，其中所述与一种或多种细胞或生物的生存力相关的分子包括NAD⁺。

9.根据权利要求1-8中任一项的方法，其中所述一种或多种细胞或生物包括细菌和/或酵母。

10.根据权利要求9的方法，其中所述一种或多种细胞或生物包括细菌。

11.根据权利要求10的方法，其中所述细菌包括葡萄球菌属(Staphylococcus)物种尤其是金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)并优选为甲氧西林抗性菌株、肠球菌属(Enterococcus)物种、链球菌属(Streptococcus)物种、分枝杆菌属(Mycobacterium)物种尤其是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、弧菌属(Vibrio)物种尤其是霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、沙门氏菌属(Salmonella)和/或大肠杆菌(Escherichia coli)中的一种或多种。

12.根据权利要求1-11中任一项的方法，其中所述酶固定在固体支持物上。

13.根据权利要求12的方法，其中所述固体支持物为珠、亲和柱或者微量滴定板中的任意种类。

14.根据权利要求1-13中任一项的方法，其中使用核酸扩增技术检测所述新核酸分子。

15.根据权利要求14的方法，其中所述核酸扩增技术选自PCR、滚环扩增、NASBA、3SR、TMA、链置换扩增和DNA寡聚体自装配法。

16.根据权利要求14或15的方法，其中使用实时技术检测扩增产物。

17.根据权利要求16的方法，其中所述实时技术包括系统、Molecular系统、系统、系统和探针系统中的任何一种。

18.根据权利要求1-17中任一项的方法，其中所述样品包括饮料或食品样品或其制备物、药品或化妆品、痰或血样或血小板样品或水样品。

19.根据权利要求1-18中任一项的方法，其还包括在步骤(a)之前过滤所述样品以浓缩所述一种或多种细胞或生物。

20.根据权利要求1-19中任一项的方法，其还包括在步骤(a)之前裂解样品中的其它细胞，但不裂解待检测的所述一种或多种细胞或生物的细胞。

21.根据权利要求1-20中任一项的方法，其还包括从样品中去除或者消耗与所述一种或多种细胞或生物的生存力相关的任何分子，所述分子不是由所述一种或多种细胞或生物提供的。

22.根据权利要求21的方法，其中所述与一种或多种细胞或生物的生存力相关的分子包括ATP。

23.根据权利要求22的方法，其中通过在由其他酶催化的反应中利用ATP来去除所述ATP。

24.根据权利要求23的方法，其中所述酶包括萤光素酶、磷酸酶和焦磷酸酶中的任何一种或多种。