[发明专利]耐受除草剂的棉花植物和用于鉴定其的方法

权利要求书

1. 用于鉴定生物样品中的原种事件EE-GH3的方法，该方法包括使用特异性识别EE-GH3的5’或3’侧翼区域的特异性引物或探针检测EE-GH3特定区域。

2. 权利要求1的方法，所述方法包括使用聚合酶链式反应和至少两种引物从存在于所述生物样品中的核酸扩增100至500bp之间的DNA片段，所述引物中的一种识别EE-GH3的5’侧翼区域或EE-GH3的3’侧翼区域，所述5’侧翼区域具有SEQ ID No 1的从核苷酸1至核苷酸732的核苷酸序列，所述3’侧翼区域具有SEQ ID No 2的从核苷酸431至核苷酸654的互补序列的核苷酸序列，所述引物的另一种引物识别外源DNA内的序列，所述外源DNA具有SEQ ID No.1的从核苷酸733至核苷酸1214的互补序列的核苷酸序列或SEQ ID No 2的从核苷酸1至核苷酸430的核苷酸序列。

3. 权利要求2的方法，其中所述识别5’侧翼区域的引物由17至200个连续核苷酸的核苷酸序列组成，所述连续核苷酸选自SEQ ID No 1的从核苷酸1至核苷酸732的核苷酸序列，或所述识别EE-GH3的3’侧翼区域的引物由17至200个连续核苷酸的核苷酸序列组成，所述连续核苷酸选自SEQ ID No 2的从核苷酸431至核苷酸654的互补序列的核苷酸序列，并且所述识别外源DNA内的序列的引物由17至200个连续核苷酸组成，所述连续核苷酸选自SEQ ID No.1的从核苷酸733至核苷酸1214的互补序列的核苷酸序列或SEQ ID No 2的从核苷酸1至核苷酸430的核苷酸序列。

4. 权利要求2的方法，其中所述识别5’侧翼区域的引物在其末端3’端包含至少17个连续核苷酸的核苷酸序列，所述连续核苷酸选自SEQ IDNo 1的从核苷酸1至核苷酸732的核苷酸序列，或所述识别EE-GH3的3’侧翼区域的引物在其末端3’端包含至少17个连续核苷酸的核苷酸序列，所述连续核苷酸选自SEQ ID No 2的从核苷酸431至核苷酸654的互补序列的核苷酸序列，并且所述识别外源DNA内的序列的引物在其3’端包含至少17个连续核苷酸，所述连续核苷酸选自SEQ ID No.1的从核苷酸733至核苷酸1214的互补序列的核苷酸序列或SEQ ID No 2的从核苷酸1至核苷酸430的核苷酸序列。

5. 权利要求4的方法，其中所述引物分别包含SEQ ID No.3和SEQID No.11的序列。

6. 权利要求5的方法，该方法包括使用EE-GH3鉴定方案扩增大约334bp的片段。

7. 用于鉴定生物样品中的原种事件EE-GH3的试剂盒，所述试剂盒包含一种识别EE-GH3的5’侧翼区域的引物或一种识别EE-GH3的3’侧翼区域的引物，以及一种识别外源DNA内序列的引物，所述5’侧翼区域具有SEQ ID No 1的从核苷酸1至核苷酸732的核苷酸序列，所述3’侧翼区域具有SEQ ID No 2的从核苷酸431至核苷酸654的互补序列的核苷酸序列，所述外源DNA具有SEQ ID No.1的从核苷酸733至核苷酸1214的互补序列的核苷酸序列或SEQ ID No 2的从核苷酸1至核苷酸430的核苷酸序列。

8. 权利要求7的试剂盒，其中所述识别5’侧翼区域的引物由17至200个连续核苷酸的核苷酸序列组成，所述连续核苷酸选自SEQ ID No 1的从核苷酸1至核苷酸732的核苷酸序列，或所述识别EE-GH3的3’侧翼区域的引物由17至200个连续核苷酸的核苷酸序列组成，所述连续核苷酸选自SEQ ID No 2的从核苷酸431至核苷酸654的互补序列的核苷酸序列，并且所述识别外源DNA内的序列的引物由17至200个连续核苷酸组成，所述连续核苷酸选自SEQ ID No.1的从核苷酸733至核苷酸1214的互补序列的核苷酸序列或SEQ ID No 2的从核苷酸1至核苷酸430的核苷酸序列。