[发明专利]用于下调H19的核酸物质及其使用方法

说明书

技术领域及背景技术

本发明涉及用于下调H19的核酸物质及其用于治疗癌症的用途。

H19是第一种被鉴定为显示仅表达母系等位基因的人类印迹非蛋白编码基因。它还在小鼠中印迹。H19的图谱显示位于人类11号染色体短臂，15.5带，与小鼠7号染色体的区域同源。它属于一组极有可能不编码蛋白产物的基因。H19基因在胚胎发生中丰富表达，但出生后在大部分组织中关闭。然而，不同肿瘤研究已经显示相对于健康组织H19基因的再表达或超表达。另外，在不同病因和谱系的癌症中，在某些情况中观察到等位基因的异常表达模式。尽管除在成熟的某阶段胚胎细胞和在绒毛外滋养母细胞以外，H19显示在发育过程中于大部分组织中为单等位基因表达，但是在越来越多的癌症中，已发现被称为“印迹松弛”或“印迹丧失(LOI)”的该基因的双等位基因表达，例如肝细胞癌，白蛋白SV40 T抗原转基因大鼠的肝新生物(neoplasm)，肺腺癌，食管癌，卵巢癌，横纹肌肉瘤，宫颈鳞状细胞癌，膀胱鳞状细胞癌，头和颈鳞状细胞癌，结肠直肠、子宫以及睾丸生殖细胞肿瘤。目前，几乎30种癌症显示相对于健康组织H19基因表达失调，具有或无LOI。对于最近的评述，参见Matouk等(Matouk等，2005，Gene Ther Mol Biol)。

还显示在软琼脂测定和一些组合的免疫缺陷(SCID)小鼠中异位来源的H19超表达赋予了乳房上皮细胞的增殖优势(Lottin等，2002，Oncogene21，1625-1631)。在通过注射绒毛膜癌衍生的细胞系(JEG-3)和膀胱癌细胞系(T24P)的细胞形成的肿瘤中，H19水平与注射前细胞中的H19水平相比非常高(Rachmilewitz等，1995，Oncogene 11，863-870)。

另外，某些已知的致癌物上调H19基因的表达。在无LOI的吸烟者的气道上皮中检测到H19RNA水平的显著升高(Kaplan等，2003，Cancer Res63，1475-1482)。在大鼠膀胱癌模型中，BBN(已知的膀胱的致癌物)也诱导H19基因的表达(Ariel等，2004，Mol Carcinog 41，69-76)。类似地，在小鼠肝细胞癌模型中，二乙基亚硝胺(已知的肝脏的致癌物)诱导H19基因的表达(Graveel等，2001，Oncogene 20，2704-2712)。所有这些观察结果和其他观察结果与最初H19是肿瘤抑制基因的提议相矛盾。

对两种仅在存在或无H19RNA的情况下不同的同源细胞群中的基因表达模式进行比较，已经鉴定了H19RNA的大量下游效应因子，其中有先前报道在肿瘤发生过程的某些方面起关键作用的一组基因。H19RNA的存在可通过上调在侵袭、迁移和生成血管的途径中起作用的基因而提高细胞的侵袭、迁移和生成血管的能力，并能因此至少导致转移级联的初始步骤。其他研究显示了H19通过作为HGF/SF的应答基因在促进癌症进展和肿瘤转移中的潜在作用。

癌细胞中H19基因的特异性表达促进了其在诊断癌症的临床应用中的用途。

因此，本发明发明人的美国专利No.5,955,273教导了H19基因作为肿瘤特异性标记物的用途。

PCT公布号WO 9524503教导了使用H19基因探针通过原位杂交检测恶性肿瘤及其分级——用于检测儿童维尔姆斯氏肿瘤(Wilms′Tumor)中恶性肿瘤的存在/不存在。

PCT公布号WO 0403159教导了H19下调用于治疗与血管发生有关的疾病，如癌症。然而，H19的下调显示不减小肿瘤大小或体积，所教导的能够下调H19的特异和有效的siRNA物质也是如此。另外，PCT公布号WO 0403159没有教导抗H19物质作为用于治疗癌症的联合疗法的部分。

因此，存在用于癌症治疗的下调H19的方法和组合物的公认需要，并且具有它们是非常有利的。

发明内容

根据本发明的一方面，提供了一种选自SEQ ID NO：1、2、3和4的分离的寡核苷酸。

根据本发明的另一方面，提供了一种药物组合物，其包含药学上可接受的载体和作为活性成分的至少一种选自SEQ ID NO：1、2、3和4的分离的寡核苷酸。

根据本发明的又一方面，提供了一种选自SEQ ID NO：1、2、3和4的分离的寡核苷酸用于制备治疗癌症的药剂的用途。

根据本发明的又一方面，提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括：