[发明专利]皮肤老化标记物及其利用技术

说明书

技术领域

本发明涉及皮肤老化标记物及其利用技术。

背景技术

皮肤的增龄变化一般从外表所见的皱纹、松弛等来识别，皮肤年龄的 推断，一直以来都在尝试基于外观变化使用机器的客观评价。实际使用的 方法，已报道的有从皱纹、松弛的程度推断实际年龄，或通过纤维内镜等 测定皮肤外表肌理的细致程度，或通过使振动器接触皮肤时的振动变化判 断皮肤年龄的方法(专利文献1～3)。

曾有人提出老化的主要原因是细胞老化，但始终未能确证细胞老化是 个体老化的原因。最近，终于有报道确证了细胞老化是个体老化的原因的 结果(非专利文献1)。认为皮肤的增龄变化在皱纹、松弛等外表变化出现 之前已在细胞水平发生了增龄变化。例如，伴随皮肤老化，会引起细胞外 基质蛋白(ECM)即胶原蛋白等减少、ECM降解蛋白酶的表达增加等各 种因子的表达变化(非专利文献2～4)。接受了生物体内产生的氧化修饰 等的异常蛋白质虽被蛋白酶体降解，但增龄的同时皮肤中的蛋白酶体表达 降低，所以会引起氧化胶原蛋白的积累(非专利文献5)。因此要准确测定 皮肤老化度，基于外表变化的评价并不充分，而从细胞水平测定生物化学 形式的增龄变化非常重要。

至今为止，作为皮肤细胞的老化标记物，已鉴定出衰老相关之β-半乳 糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase(SA-β-Gal))，并证明SA-β-Gal 在最终分化的细胞中不表达而只在老化的细胞中特异性表达，与人体皮肤 组织的老化密切相关(非专利文献6)。除此之外的皮肤老化标记物，已报 导的有丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor)之一的Maspin、半胱 氨酸蛋白酶抑制剂(cysteine protease inhibitor)之一的胱抑素A(Cystatin A) 等(非专利文献7、8)。

作为探索皮肤老化的生物标记物的方法，特定的细胞置于特定的条件 下时，将该细胞内存在的全蛋白质[蛋白质组(proteome)]通过二维电泳 分离，再通过质谱仪鉴定的方法(蛋白质组学(proteomics))行之有效。 实际上，从年轻人和老年人的皮肤组织中提取蛋白质，通过蛋白质组学 (proteomics)研究，发现了因皮肤老化而发生显著变化的蛋白质有真核 翻译起始因子-5A(eIF-5A)、环孢霉素A(Cyclophilin A)、蛋白酶体蛋白 (Proteasomal protein)、蛋白酶体激活因子28-α(PA28-α)、色氨酸-tRNA合 成酶(Tryptophanyl-tRNA synthetase)、热休克蛋白60(HSP60)、膜连蛋白 I(Annexin I)、NM23 H2(核苷二磷酸酶激酶(nucleoside diphosphatase kinase))、磷酯酰肌醇3激酶的调节亚单位β亚型(PI3K p85βisoform)、锰 -超氧化物歧化酶(Mn-superoxide dismutase)、纤溶酶原激活剂抑制剂 -2(PAI-2)、Mx-A蛋白(Mx-A protein)(非专利文献9)。但是，至今为止 对皮肤进行的蛋白质组学(proteomics)研究是使用皮肤组织的提取物或 细胞提取物的分析，还没有着眼于大量含有微量分泌蛋白质的细胞培养上 清液进行蛋白质组学(proteomics)研究的先例。用经鉴定的皮肤老化标 记物对人体皮肤的检测是对通过活检取出的皮肤组织进行免疫染色等实 用性低的方法，还没有使用下述实用性高的方法进行测试的先例，即使用 可非侵袭、安全、简便地采集角质层的角质测试仪(checker)采集角质层， 从中提取蛋白质测定皮肤老化标记物表达。

专利文献1：日本特开2002-330943号公报

专利文献2：日本特开2002-360544号公报

专利文献3：日本特开2001-212087号公报

非专利文献1：J.Clinic.Invest.，114，1299-1307，2004

非专利文献2：Mol.Cell.Biochem.1999 Apr，194(1-2)：99-108

非专利文献3：J.Investig.Dermatol.Symp.Proc.，3(2)，172-179，1998