[发明专利]用于生产全2’-修饰的核酸转录产物的材料和方法

权利要求书

1.一种分离的T7 RNA聚合酶，在639位点和784位点包括一 种改变的氨基酸，其中，当在784位点的改变的氨基酸是丙 氨酸时，在639位点的改变的氨基酸不是苯基丙氨酸。

2.根据权利要求1所述的分离的T7 RNA聚合酶，在378位点 进一步包括一种改变的氨基酸。

3.根据上述任意一项权利要求所述的分离的T7 RNA聚合酶， 在266位点进一步包括一种改变的氨基酸。

4.根据上述任意一项权利要求所述的分离的T7 RNA聚合酶， 其中，在639位点的改变的氨基酸是亮氨酸，在784位点的 改变的氨基酸是丙氨酸。

5.根据上述任意一项权利要求所述的分离的T7 RNA聚合酶， 其中，在266位点的改变的氨基酸是亮氨酸。

6.根据上述任意一项权利要求所述的分离的T7 RNA聚合酶， 其中，在378位点的改变的氨基酸是精氨酸。

7.根据上述任意一项权利要求所述的分离的T7 RNA聚合酶， 其中，改变的氨基酸增加了由聚合酶在包括2’-OMe修饰核 苷三磷酸的转录反应中产生的包括2’-OMe修饰作用的核酸 的转录产量。

8.根据权利要求8所述的分离的T7 RNA聚合酶，其中，当转 录作用在同一个转录条件下进行时，转录产量的增加与缺乏 改变的氨基酸的T7 RNA聚合酶有关。

9.根据上述任意一项权利要求所述的分离的T7 RNA聚合酶， 其中，改变的氨基酸减弱对2’-OMe核苷三磷酸的识别能力。

10.根据权利要求9所述的分离的T7 RNA聚合酶，其中减弱的 对2’-OMe核苷三磷酸的识别能力与缺乏改变的氨基酸的T7 RNA聚合酶有关。

11.根据权利要求8或10所述的分离的T7 RNA聚合酶，其中， 缺乏改变的氨基酸的T7 RNA聚合酶是一种野生型T7 RNA 聚合酶，该野生型聚合酶在639位点上的氨基酸变为苯基丙 氨酸且在784位点上的氨基酸改变为丙氨酸。

12.一种分离的多肽，包括选自由SEQ ID NO 1，SEQ ID NO 2，SEQ ID NO 102和SEQ ID NO 103所组成的组的氨基 酸。

13.一种转录单链核酸的方法，包括将前述任意一项权利要求所 述的聚合酶与一种模板核酸在足够产生转录作用的反应条 件下一起培养。

14.一种分离的核酸，该核酸编码前述任意一项权利要求所述的 多肽。

15.一种分离的核酸序列，选自由SEQ ID NO 122，SEQ ID N O 123，SEQ ID NO 124和SEQ ED NO 125所组成的组 中。

16.一种载体，包括权利要求14或15所述的分离的核酸序列。

17.一种表达载体，包括与一种启动子可操作地连接的权利要求 14或15所述的分离的核酸。

18.一种细胞，包括权利要求17所述的表达载体。

19.根据权利要求18所述的细胞，其中突变体T7 RNA聚合酶 被该细胞表达。

20.一种试剂盒，包括一种容器，该容器包括根据上述任意一项 权利要求所述的T7 RNA聚合酶。

21.一种试剂盒，包括一种容器，该容器包括一种核酸，该核酸 编码上述任意一项权利要求所述的T7 RNA聚合酶。