[发明专利]新的噬菌体展示技术

权利要求书

1. 用于DNA的双向克隆的噬菌粒载体，该DNA编码与两个功能性外壳蛋白质的任一个的N末端融合的氨基酸序列。

2. 噬菌粒载体，其包含：

a)编码第一个功能性外壳蛋白质的DNA，在其5’端包含第一个DNA接头；和

b)编码第二个功能性外壳蛋白质的DNA，具有与第一个功能性外壳蛋白质相反的转录方向，并且在其5’端包含第二个DNA接头；

其中第一个和第二个DNA接头包含至少一个同一的限制性内切酶位点，该位点不存在于噬菌粒载体中所述接头之外。

3. 权利要求2的载体，其中DNA接头可以与编码功能性外壳蛋白质的DNA的5’端按读码框转录，和与编码通过所述功能性外壳蛋白质融合和展示的蛋白质序列的DNA的3’端按读码框转录。

4. 权利要求3的载体，其中第一个和第二个DNA接头包含选自SEQID NO.：1和SEQ ID NO.：2的序列。

5. 权利要求3的载体，其中第一个和第二个DNA形成选自SEQ IDNO.：4和SEQ ID NO.：5的序列。

6. 权利要求5的载体，包含cp3^＊DDcp8^＊(SEQ ID NO.：10)。

7. 前述权利要求的任一项的载体，还包含用于克隆、表达和展示至少一个蛋白质序列的DNA表达盒，该蛋白质序列通过所述DNA接头之一融合于所述功能性外壳蛋白质的任一个的N末端。

8. 权利要求7的噬菌粒载体，其中通过DNA接头融合于两个功能性外壳蛋白质的任一个的N末端的蛋白质序列是抗体、抗体片段、表位、表位结合区、抗原、变应原、生物活性肽、酶、酶抑制剂、酶催化位点、DNA结合蛋白质、分离的蛋白质结构域、受体的配体、受体、生长因子、细胞因子和目的蛋白质序列的连续或重叠的片段。

9. 前述权利要求的任一项的载体，其中编码两个功能性外壳蛋白质的DNA是修饰的cp3(cp3^＊，SEQ ID NO.：6)和cp8(cp8^＊，SEQ ID NO.：8)。

10. 权利要求7的载体，其包含DDa表达盒(SEQ ID NO.：11)或DDb表达盒(SEQ ID NO.：12)。

11. 权利1到10的载体用于产生噬菌体或细胞文库的用途，其中所述文库的各个蛋白质序列通过DNA接头融合于两个功能性外壳蛋白质的任一个的N末端。

12. 使用权利要求1到10的载体获得的噬菌体或细胞文库，其中所述文库的各个蛋白质序列通过DNA接头融合于两个功能性外壳蛋白质的任一个的N末端。

13. 权利要求12的噬菌体或细胞文库，其中通过DNA接头融合于两个功能性外壳蛋白质的任一个的N末端的蛋白质序列是抗体、抗体片段、表位、表位结合区、抗原、变应原、生物活性肽、酶、酶抑制剂、酶催化位点、DNA结合蛋白质、分离的蛋白质结构域、受体的配体、受体、生长因子、细胞因子和目的蛋白质序列的连续或重叠的片段。

14. 权利要求12的噬菌体或细胞文库，其中两个功能性外壳蛋白质是修饰的cp3蛋白质(cp3^＊蛋白质，SEQ ID NO.：7)和修饰的cp8蛋白质(cp8^＊蛋白质，SEQ ID NO.：9)。

15. 用于产生噬菌体或细胞文库的试剂盒，其中所述文库的各个蛋白质序列通过DIS接头融合于两个功能性外壳蛋白质的任一个的N末端，包含权利要求1到10的载体。

16. 用于产生噬菌体或细胞文库的方法，其中所述文库的各个蛋白质序列通过DNA接头融合在两个功能性外壳蛋白质的任一个的N末端，该方法包括：

a)在权利要求2的载体的相应DNA接头中插入DNA表达盒；和

b)用产生的载体转化细菌细胞。

17. 权利要求11的方法，其中通过连接已经用BglI消化的DNA表达盒和所述载体从而获得所述DD表达盒的插入。

18. 通过权利要求16或17的方法获得的重组噬菌体或融合蛋白质用于结合、检测、中和、和/或改变配体、细胞或靶分子的用途，其中所述重组噬菌体或融合蛋白质是以分离的形式或以混合物的形式。