[发明专利]用于执行实时PCR反应的装置

说明书

技术领域

本发明涉及根据权利要求1前序部分的装置。

背景技术

这种类型的装置用于执行核酸放大方法(Nucleinsaeureamplifizierungsverfahren)(以下称为PCR反应)，其中光学地测量PCR反应期间放大产物(Amplifikationsprodukete)(PCR产物)的形成。该特殊形式的PCR被称为实时PCR反应。

在实时PCR反应中，通常测量包含在激发之后发出强度取决于所形成的PCR产物的量的荧光信号的荧光指示剂的试验物(Versuchsansaetze)。通常，对于实时PCR反应，随着反应持续时间的经过，可以通过所测量的荧光信号的强度的增大来跟踪PCR产物的增加。

合适的荧光指示剂的一个已知的例子例如是染料SYBR绿色(Sybrgreen)，其被非特异性地(unspezifisch)掺入双链DNA(Doppelstrang-DNA)中，并且在被掺入状态下发出荧光信号。存在一系列其他的合适的荧光指示剂，它们是本领域技术人员已知的，并且在这里不逐一介绍。补充地参见文献“Neusser；TranskriptLaborwelt Nr.2/2000；“Echtzeit-PCR-Verfahren zur Quantifizierungvon PCR-Produkten””，其详细介绍了实时PCR反应的不同可能性。

可以用于执行实时PCR反应的装置通常包括具有反应区域的热循环器(Thermocycler)，其中在该反应区域中设置多个用于反应器的温控的(temperierbar)容纳器(Aufnahme)。此外，设置对应于该反应区域的照明设备，其包括多个发光二极管，通常对于每个记录设置一个二极管。还设置根据所测量的光强度生成测量值的探测器。探测器例如可以是CCD芯片或光电倍增管或者包含CCD芯片或光电倍增管。

该装置还包括适当的光学设备，用于限定从照明设备到反应腔、并从反应腔到探测器的光程。光学设备例如包括设置在照明设备和容纳器之间的二向色性的(dichroitischen)反射镜，其使来自照明设备的激发光通过到容纳器，并将从反应区域所发出的长波荧光信号反射到例如侧面设置的探测器。通常，还设置一系列的其他的例如设置在探测器前面的滤光器和透镜。

已知实时PCR装置的一个问题在于，温度或甚至电流波动可能影响测量。仅仅为了举一些例子，例如可以想到，发光二极管所产生的激发光随着工作时间的增加而变弱，或者在装置在不同温度下工作时光学设备遭受偏移。

例如WO01/35079公开了为了使发光二极管标准化，设置包括光电二极管形式的独立的探测器的基准设备，其中借助于该基准设备测量发光二极管并用试样测量值计算(verrechnen)所测量的基准值。

该已知装置的缺点在于不进行探测器的检查。

DE20122266.3公开了，为了补偿装置中可能发生的热影响，设置基准光程，该基准光程与测量光程类似地延伸，区别在于对应于基准光程的发光二极管不照射容纳器中的PCR填料(Ansatz)，而是照射例如可设置在容纳器上的基准面。从该面反射的光被探测器分析，其中PCR期间的改变被用于校正测量值。该装置相对昂贵。

发明内容

本发明的任务在于，在现有技术的基础上提供一种装置，借助于该装置可以以简单的方式识别和补偿可能出现的测量值偏移。

该任务通过具有权利要求1特征部分特性的装置来实现。

根据本发明，在装置中设置基准设备，该基准设备包括相对于照明设备独立的基准发光二极管，基准发光二极管的光在反应区域之后被耦入光程中。

在从属权利要求中给出了本发明的有利实施方式。

在已知装置中基本上只检查用于测量PCR填料的发光二极管，而本发明使用单独的发光二极管以便对可能出现的源自电源供应波动或温度波动的测量值偏移进行定量和补偿。

有利地，设置发射光谱比照明设备的发光二极管(14)的发射光谱宽的二极管作为基准发光二极管。

在照明设备中，通常设置例如生成波长低于探测波长的窄带蓝光的二极管，借助于该二极管照射设置在探测器设备中的倍增器。尤其有利地，设置生成宽带白光的二极管作为基准发光二极管。借助于这样的基准发光二极管，可以在探测器设备的所有滤光位置(Filterstellung)直接照射所有倍增器。

可以通过附加的温度测量可靠地补偿蓝色和白色二极管的温度偏移差别。已经表明，例如蓝色和白色二极管在其类型内只具有温度偏移的非常小的扩散(Streuung)。