[发明专利]诊断和治疗炎性应答的方法

说明书

联邦基金资助研究相关声明

本研究由National Institutes of Health的National Heart，Lung，and Blood Institute的补贴支持(编号PO1 HL076540)。美国政府因此可能享 有本发明的某些专利。

发明背景

本发明涉及对炎性应答进行诊断和治疗的领域。

炎性应答与威胁生命的病症，例如败血症、严重败血症以及败血症 性休克相关。败血症被定义为对感染的全身性炎性应答。严重败血症与 器官机能障碍相关，其常见(在美国每年新增750,000例)且死亡率高 (30％)。发病率预计每年增加1.5％，这归因于人群老化以及免疫遏制 剂和侵入性程序的更广泛使用。宿主对感染的应答是复杂的，其涉及可 溶介体(例如，炎性和凝血级联的组分)和细胞(例如，血小板、单核 细胞和内皮细胞)的精巧排列。人们之前为了阻止炎性或凝血途径中一 种或另一组分的努力对存活的影响甚小。在已测试的多种试剂和药物 中，仅有两种在3期临床试验中展示出效力：针对人肿瘤坏死因子(TNF) -α的鼠单克隆抗体和人重组活化蛋白C(rhAPC)。但是，尽管有这些措 施，死亡率依然保持为25～30％的高位。显然，随着对败血症病理生理 学的理解加深，将有可能取得疗法上的进步。未被治疗的严重败血症导 致高死亡率，在本发明之前缺少有效的治疗方法，因此人们需要针对炎 性应答(例如败血症)的更好的诊断和治疗工具。

血管内皮生长因子(VEGF)/血管通透因子(VPF)是Dvorak及同 事最初鉴定并表征的，其被鉴定表征为内皮通透性的有效刺激因子。 VEGF随后被报道为能促进内皮细胞的增殖、迁移(migration)和存活。 VEGF(也被称为VEGF-A)是下述逐渐增加的相关蛋白家族的成员，所 述家族包括VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和得自胎盘的生长因子(PlGF)。 VEGF与两种跨膜受体(即Flt-1和Flk-1)结合，而PlGF仅与Flt-1结合。 在血管壁中，Flk-1在内皮中选择性表达。Flt-1则既存在于内皮细胞又存 在于单核细胞中。

发明内容

在第一个方面，本发明提供了在测试受试者(例如，人)中诊断炎 性应答(例如，严重败血症或败血症性休克)的方法，所述方法包括分 析从测试受试者分离的样品中的sFlt-1表达或活性水平，其中，样品中 sFlt-1表达或活性水平相对未受影响的受试者中发现的水平而言，增加则 表明该测试受试者具有炎性应答。所述方法还可包括分析VEGF、PlGF、 TNF-α、IL-6、D-二聚体、E-选择蛋白、P-选择蛋白、ICAM-1、VCAM-1、 Cox-2或PAI-1中至少一种的水平。

本发明还提供了鉴定可用于对具有炎性应答的受试者进行治疗的 候选化合物的方法，所述方法包括将sFlt-1与化合物(例如，选自化学物 质文库的化合物)接触；以及测量sFlt-1的活性，其中，在存在所述化合 物时的sFlt-1活性相对不存在该化合物时的sFlt-1活性增加，则将该化合 物鉴定为用于治疗具有炎性应答的受试者的候选化合物。测量步骤可包 括测量VEGF或PlGF中的至少一种与sFlt-1的结合。

本发明还提供了鉴定可用于对具有炎性应答的受试者进行治疗的 候选化合物的方法，所述方法包括：将包括编码sFlt-1的多核苷酸的细胞 (例如哺乳动物中的细胞)或细胞提取物与化合物(例如，选自化学物 质文库的化合物)接触；以及测量sFlt-1在所述细胞或细胞提取物中的表 达水平，其中，在存在所述化合物时的sFlt-1的表达水平相对不存在该化 合物时的水平增加，则将该化合物鉴定为用于治疗具有炎性应答的受试 者的候选化合物。所述方法还可包括在接触步骤之前向哺乳动物施用脂 多糖。

本发明还提供了治疗具有炎性应答(例如，严重败血症或败血症性 休克)的受试者(例如，人)的方法，所述方法包括向受试者施用治疗 有效量的组合物(例如，包括sFlt-1的组合物)，所述组合物增加sFlt-1 的表达或活性。所述方法还可包括施用选自由杀菌剂、流体、血管加压 剂、皮质类固醇、活化蛋白C、胰岛素葡萄糖、机械通气、肾替代疗法 和镇静构成的组的治疗。