[发明专利]治疗癌症的HAMLET和HDAC抑制剂的治疗组合

说明书

本发明涉及生物活性成分的组合，已发现所述生物活性成分在治疗增生性疾病，例如引起诸如癌症的肿瘤的那些增生性疾病中是特别有效的。

HAMLET(使肿瘤细胞致死的人α-乳清蛋白，Human α-lactalbuminmade lethal to tumour cells)是一种诱导肿瘤细胞中细胞死亡的分子络合物。的确，该作用对于肿瘤细胞是选择性的，一些未成熟细胞和健康的分化细胞并不响应于HAMLET而经历细胞死亡。该选择性意味着HAMLET达到肿瘤细胞中的独特靶，但不是在抗性细胞中。

具有相似活性的该络合物的生物活性变异体或衍生物例如在国际专利申请PCT/IB03/01293中有述。

HAMLET的细胞靶已通过共焦显微镜术和亚细胞分级的组合来研究[Hakansson等人，1999Exp Cell Res.246，451-60]。HAMLET与细胞表面结合，并进入细胞质，在那里HAMLET与线粒体相互作用并使线粒体活化。最终蛋白质进入细胞核，并在其中聚集。

本申请人已发现，抗性和敏感细胞以相似效率结合HAMLET到它们的表面上，表明这不是有辨别力的行为。反之，核聚集只发生于垂死细胞中，表明该步骤使敏感细胞与抗性细胞区别开。通过共焦显微镜术，所述核聚集看来是不可逆的，表明在核区室(nuclear compartment)中存在着结合并保留HAMLET的核靶。

本申请人已进行了HAMLET的核内分布的更深入研究，并已发现蛋白质优先定位于相当于核仁的区域，意味着HAMLET与涉及染色质结构调整的分子相互作用。

作为进一步研究的结果，识别出HAMLET的核靶。惊讶地发现，HAMLET与特定的组蛋白蛋白质相互作用(见WO2003/098223)，其作用方式与组蛋白尾部的存在无关。因此看来该相互作用可能是不可逆地锁定细胞进入死亡途径的事件。看来HAMLET具有该作用方式在抗肿瘤领域中是唯一的。

然而，关于它的作用机理毫无所知，特别是不了解染色质扰动的机理和对细胞存活能力的作用。

组蛋白乙酰基转移酶(HAT)和组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)分别调控组蛋白尾部中赖氨酸残基的乙酰化作用和脱乙酰作用。增加的组蛋白乙酰化作用削弱了与带负电的碱基的静电相互作用，减弱了组蛋白与DNA的相互作用并使得转录因子进入靶基因。

组蛋白脱乙酰基酶(HDACs)涉及多发性癌，因为它们抑制多基因(包括肿瘤抑制基因)的转录。

HDACs已作为用于开发治疗人类癌症的酶抑制剂的分子靶而出现。HDACs一般在肿瘤中过表达，并通过阻断抗肿瘤基因如p21WAF1和P27KIP1的转录来促进肿瘤细胞长寿。现在，许多HDAC抑制剂由于它们抗多种人类恶性肿瘤的活性而在体内和体外使用。

例如，已经显示HDAC抑制剂曲古抑菌素A(TSA)和N-辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)在体内和体外都分别具有对乳腺癌和前列腺癌的活性，最近也显示缩肽(depsipeptide)在治疗早期I/II试验中T细胞淋巴瘤期间具有临床活性。

另外，HDAC抑制剂已经与其它抗肿瘤药物组合用于癌症治疗，取得不同程度的成功。例如当与化学治疗剂一起使用时，组合作用从是协同的到拮抗的或增加毒性的。

当HDAC抑制剂与脱甲基剂、核受体配体、信号转导抑制剂和Hsp90拮抗剂和蛋白酶体抑制剂组合时，注意到有增强作用或协同作用(Drummond等人，出处同上)。

不完全理解所述使HDAC抑制剂促进其它治疗的相互作用。不过，当用与任何已知疗法完全不同的作用方式处理分子时，如HAMLET，不可能预测与HDAC抑制剂的组合治疗将如何施行，特别是当两种试剂看来都直接与相同的靶，即组蛋白相互作用时，虽然在组蛋白分子内不同的位置上。

不过本申请人已发现，虽然HAMLET不是HDAC抑制剂，但是当与HDAC抑制剂联合使用时，HAMLET-诱导的细胞死亡以协同方式有所增强，产生新的组合治疗方法。

根据本发明，提供成分(i)和成分(ii)的组合，成分(i)是HAMLET或其生物活性修饰物，或这些中任一的生物活性片段，成分(ii)是组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂。