[发明专利]用透明质酸低聚衍生物覆盖的细胞表面

说明书

技术领域

本发明涉及将碳水化合物定位于细胞或多细胞结构表面的方法，和用于这种方法的碳水化合物-脂类结构。

特别是，本发明涉及用于将透明质酸定位于细胞或多细胞结构表面的碳水化合物-脂类结构，和其在体外受精和胚胎移植的方法中的用途。

背景技术

细胞和多细胞结构的发育受细胞外基质(ECM)的影响。透明质酸(HA)是ECM的主要糖胺多糖组分。

HA是一种在女性生殖道中最丰富的糖胺多糖(GAGs)(Lee和Ax(1984)；Toole(1991))。已经显示，用HA补充半合成与合成培养基可以提高体外成熟和受精牛胚胎发育至胚泡阶段，不会影响胚胎质量和冷冻后的存活。

为了提高从体外成熟牛卵母细胞中产生体外胚泡的效率，已经建议在培养基中包含HA(Furnus等人(1998))。实际上，在个别研究中，当HA是在培养基中的大分子时，可以观察到胚泡转移后，移植和胎儿发育的最高比例(Gardner等人(1999))。

一些补充有HA的商品胚胎移植培养基产品是可得到的(EmbryoGlueVitrolife，UTM ^TM Medicult)。尽管可利用这些产品，但对于HA在移植和胎儿发育的有益效果的基础还没有充分地理解。

HA可以起到生物物理学作用，这种作用可以调节胚胎和子宫内膜表面之间的相互影响。Furnus等人(1998)提出，HA可以有益于胚胎发育本身，或调节胚胎所合成因子的作用，其以自分泌方式起作用。

Gardner等人(1999)提出，在他们已发生的研究中，当血清白蛋白和HA存在于相同培养基中时，获得了最高细胞数量和孵育率。这些作者建议，胚胎培养基应该含有血清白蛋白和HA两者，而转移培养基只需要含有HA。

发明内容

本发明的一个目的是提供用于将碳水化合物定位于胚胎表面的碳水化合物-脂类结构。

本发明的进一步目的是提供用于影响细胞和多细胞结构发育的碳水化合物-脂类结构。

本发明的更进一步目的是提供用于提高由辅助生殖技术得到成功结果的可能性的方法。

这些目的可分别理解，以便至少给公众提供有用的选择。

发明公开

在第一个方面，本发明提供了将透明质酸定位于细胞或多细胞结构表面的方法，包括下列步骤：

·使细胞或多细胞结构与结构为F-S₁-S₂-L的碳水化合物-脂类结构的分散体接触

其中：

F是透明质酸的低聚物或聚合物，透明质酸由β1-4连接的葡糖醛酸β1-3N-乙酰氨基葡萄糖(GlcUAβ1-3GlcNAc)的双糖单元组成；

S₁-S₂是连接F至L的间隔基；和

L是选自二酰基-或二烷基-甘油脂的脂类，包括甘油磷脂。

优选F、S₁、S₂和L共价连接。

优选F是15-20mer。

优选，选择S₁-S₂，以提供可稳定地引入脂双层的水溶性结构。

优选L选自下列构成的组：二酰基甘油脂、磷酸脂、卵磷脂、脑磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油，和衍生自下列一或多种的双磷脂酰甘油：反式-3-十六碳烯酸、顺式-5-十六碳烯酸、顺式-7-十六碳烯酸、顺式-9-十六碳烯酸、顺式-6-十八碳烯酸、顺式-9-十八碳烯酸、反式-9-十八碳烯酸、反式-11-十八碳烯酸、顺式-11-十八碳烯酸、顺式-11-二十碳烯酸或顺式-13-二十二碳烯酸(docsenoic acid)。更优选，脂类源自于一或多种顺式-不饱和脂肪酸。最优选L选自：1，2-O-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰乙醇胺(DOPE)，1，2-O-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷脂酰乙醇胺(DSPE)和rac-1，2-二油酰基甘油(DOG)。

在本发明第一个方面的第一个实施方案中，L是甘油磷脂，碳水化合物-脂类结构包括下列子结构：

其中n＝3至5，*不是H。优选n是3。

在本发明第一个方面的第二个实施方案中，L是甘油脂，碳水化合物-脂类结构包括下列子结构：

其中*不是H，m＝3至5，n＝9至16。优选n是10。

在本发明第一个方面的优选第三个实施方案中，L是甘油磷脂，且碳水化合物-脂类结构包括下列子结构：

其中n＝3至5，*不是H。优选n是3。