[发明专利]显性失活突变体KRP蛋白保护活性细胞周期蛋白－CDK复合物不受野生型KRP抑制

权利要求书

1.分离的突变体植物KIP相关蛋白(KRP)多肽，其由下述氨基 酸序列组成：

相对于野生型植物KRP多肽具有修饰的KRP氨基酸序列，所述野 生型KRP多肽包含(a)赋予对于细胞周期蛋白的结合亲和力的细胞周 期蛋白结合区域和(b)赋予对于CDK的结合亲和力的细胞周期蛋白依 赖性激酶(CDK)结合区域；

其中所述修饰在所述CDK结合区域内，以便相对于所述野生型KRP 多肽，赋予所述突变体KRP多肽对于所述CDK的经修饰的结合亲和力；

其中相对于所述野生型KRP多肽，所述突变体KRP多肽基本上维 持对于所述细胞周期蛋白的结合亲和力；

其中所述突变体KRP多肽可以与所述野生型KRP多肽竞争结合所 述CDK；

其中所述修饰在相应于芸苔属植物KRP1(BnKRP1)氨基酸145- 168的区域内，并且仅涉及选自下述的位置组合：

(a)相应于BnKRP1氨基酸151的位置和相应于BnKRP1氨 基酸153的位置；

(b)相应于BnKRP1氨基酸149的位置、相应于BnKRP1氨 基酸151的位置和相应于BnKRP1氨基酸153的位置；

(c)相应于BnKRP1氨基酸164的位置和相应于BnKRP1氨 基酸165的位置；和

(d)相应于BnKRP1氨基酸151的位置、相应于BnKRP1氨 基酸153的位置、相应于BnKRP1氨基酸164的位置和相应于 BnKRP1氨基酸165的位置；

其中所述修饰为氨基酸置换；并且

其中所述BnKRP1由核苷酸序列SEQIDNO：23编码。

2.权利要求1的突变体植物KRP多肽，其中所述野生型KRP多肽 是欧洲油菜、拟南芥、大豆、玉米、小麦、稻、苜蓿、棉花、亚麻荠 或杨树KRP多肽。

3.权利要求1的突变体植物KRP多肽，其中所述野生型KRP多肽 是拟南芥属植物或芸苔属植物KRP1多肽。

4.权利要求1的突变体植物KRP多肽，其中所述氨基酸置换是非 丙氨酸至丙氨酸的置换或者是非保守氨基酸置换。

5.权利要求3的突变体植物KRP多肽，其相对于由核苷酸序列 SEQIDNO：23编码的野生型BnKRP1多肽而言，是突变体BnKRP1多 肽。

6.权利要求5的突变体植物KRP多肽，其是

(1)BnKRP1F151A；F153A，即SEQIDNO：81；

(2)BnKRP1Y149A；F151A；F153A，即SEQIDNO：82；

(3)BnKRP1E164A；W165A，即SEQIDNO：89；或

(4)BnKRP1F151A；F153A；E164A；W165A，即SEQIDNO：85。

7.权利要求3的突变体植物KRP多肽，其是相对于由核苷酸序列 SEQIDNO：2编码的野生型AtKRP1多肽而言的突变体AtKRP1多肽， 其中所述氨基酸置换是F173A和F175A。

8.重组核酸，其编码权利要求1-7中任一项的突变体KRP多肽。

9.表达载体，其包含复制子和权利要求8的重组核酸。

10.权利要求9的表达载体，其是进一步包含与所述重组核酸可 操作地连接的启动子区的表达载体。

11.权利要求10的表达载体，其中所述启动子区在植物细胞中是 可操作的。

12.权利要求11的表达载体，其中所述启动子区包含CaMV35S 启动子或LFAH12启动子。

13.权利要求10的表达载体，其中所述启动子区以组织和/或器 官特异性方式在转录上有活性。

14.宿主细胞，其包含权利要求8的重组核酸。

15.宿主细胞，其包含权利要求9-13中任一项的载体。