[发明专利]噬菌体展示多肽的选择性翻译后修饰

权利要求书

1.一种嗜菌体，其含有一种多肽，所述多肽含有至少一种翻译后修饰的芳基-叠氮化物非天然氨基酸残基，其中所述翻译后修饰的芳基-叠氮化物非天然氨基酸残基通过施陶丁格连接反应产生。

2.如权利要求1所述的嗜菌体，其特征在于，所述嗜菌体是存活的。

3.如权利要求1所述的嗜菌体，其特征在于，所述嗜菌体是丝状嗜菌体。

4.如权利要求1所述的嗜菌体，其特征在于，所述嗜菌体是M13-衍生的嗜菌体。

5.如权利要求1所述的嗜菌体，其特征在于，所述多肽是融合多肽。

6.如权利要求5所述的嗜菌体，其特征在于，所述融合多肽含有位点特异性蛋白酶可特异性切割的肽接头蛋白酶识别序列。

7.如权利要求6所述的嗜菌体，其特征在于，所述位点特异性蛋白酶选自：凝血因子Xa、凝血因子XIa、激肽释放酶、凝血酶、凝血因子XIIa、胶原酶或肠激酶。

8.如权利要求1所述的嗜菌体，其特征在于，所述芳基-叠氮化物非天然氨基酸残基是对-叠氮基-L-苯丙氨酸残基。

9.如权利要求1所述的嗜菌体，其特征在于，所述嗜菌体固定在固体支持物上。

10.多个如权利要求1所述的嗜菌体。

11.多个如权利要求1所述的嗜菌体，其中所述多个嗜菌体展示多种不同多肽。

12.如权利要求11所述的多个嗜菌体，其特征在于，所述多个嗜菌体含有嗜菌体展示文库。

13.如权利要求1所述的嗜菌体，其特征在于，所述嗜菌体经纯化或分离。

14.一种产生翻译后修饰嗜菌体的方法，所述方法包括：

(a)提供含有多肽的嗜菌体，所述多肽含有至少一种芳基-叠氮化物非天然氨基酸残基；和

(b)使所述嗜菌体在其中所述非天然氨基酸残基经历共价修饰的条件下反应，其中所述条件包括施陶丁格连接反应，从而产生翻译后修饰的嗜菌体。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，通过所述方法产生的所述翻译后修饰嗜菌体是存活的。

16.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述至少一个芳基-叠氮化物非天然氨基酸残基是对-叠氮基-L-苯丙氨酸残基。

17.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述提供步骤包括：

(i)提供包含以下组分的真细菌宿主细胞：

(A)编码所述噬菌体的核酸分子，所述核酸分子包含编码所述多肽的多核苷酸亚序列，所述多核苷酸亚序列包含至少一个选择者密码子；

(B)编码在所述宿主细胞中正交的氨酰-tRNA合成酶(O-RS)的核酸分子；

(C)编码在所述宿主细胞中正交的tRNA(O-tRNA)的核酸分子，其中所述O-RS在所述宿主细胞中用所述非天然氨基酸优先氨酰化所述O-tRNA，其中所述O-tRNA识别所述选择者密码子；和

D)芳基-叠氮化物非天然氨基酸；和

(ii)培养所述宿主细胞，从而产生所述多核苷酸亚序列编码的多肽，其中所述芳基-叠氮化物非天然氨基酸在翻译期间对选择者密码子起反应而掺入所述多肽，从而产生包含由所述多核苷酸亚序列编码的多肽的噬菌体，其中所述芳基-叠氮化物非天然氨基酸掺入所述多肽。

18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述提供步骤包括提供大肠杆菌宿主细胞。

19.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述提供步骤包括提供包含编码O-RS的核酸分子的真细菌宿主细胞，其中所述O-RS衍生自詹氏甲烷球菌氨酰-tRNA合成酶。

20.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述提供步骤包括提供包含编码O-RS的核酸分子的真细菌宿主细胞，其中所述O-RS衍生自詹氏甲烷球菌酪氨酰-tRNA合成酶。

21.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述提供步骤包括提供包含编码O-tRNA的核酸分子的真细菌宿主细胞，其中所述O-tRNA是琥珀抑制型tRNA。