[发明专利]非胚胎干细胞分化成具有胰腺表型的细胞

权利要求书

1.一种方法，所述方法包含将表达Oct-4和端粒酶且可以分化成 外胚层、内胚层和中胚层细胞类型的非胚胎干、非生殖、非胚胎生殖 细胞与一种第一试剂和一种第二试剂相接触以产生Pdx-1表达升高的 细胞，其中所述第一试剂是激活素A，所述第二试剂抑制音猬因子 (SHH)活性。

2.权利要求1的方法，所述方法进一步包含将所述非胚胎干、非 生殖、非胚胎生殖细胞与BMP4相接触。

3.权利要求1或2的方法，所述方法进一步包含将Pdx-1表达升 高的细胞与EGF和/或HGF相接触，以产生Ngn3表达升高的细胞。

4.权利要求3的方法，其中所述的Ngn3表达升高的细胞的NeuroD 表达也升高。

5.权利要求3的方法，所述方法进一步包含将所述的Ngn3表达 升高的细胞与烟酰胺和/或exendin4相接触以产生表达胰岛素的细胞。

6.权利要求5的方法，其中胰岛素表达量升高且超过所述表达 Ngn3的细胞的胰岛素表达量。

7.权利要求5的方法，所述方法进一步包含将所述的Ngn3表达 升高的细胞与GDF11和/或β-细胞素相接触。

8.一种方法，所述方法包含将表达Ngn3的细胞与烟酰胺或 exendin4两者中的一种或与这两者相接触以产生表达胰岛素的细胞， 所述表达Ngn3的细胞已经通过下述过程制备：(1)将表达Oct-4和端 粒酶且可以分化成外胚层、内胚层和中胚层细胞类型的非胚胎干、非 生殖、非胚胎生殖细胞与一种第一试剂和一种第二试剂相接触以产生 Pdx-1表达升高的细胞，其中所述第一试剂是激活素A，所述第二试 剂抑制音猬因子(SHH)活性；以及(2)将Pdx-1表达升高的细胞与EGF 和/或HGF相接触，以产生Ngn3表达升高的细胞。

9.权利要求8的方法，其中所述的非胚胎干、非生殖、非胚胎生 殖细胞进一步与BMP4相接触。

10.权利要求8的方法，其中所述的Ngn3表达升高的细胞进一步 与GDF11和/或β-细胞素相接触。

11.权利要求8的方法，其中所述的Ngn3表达升高的细胞的 NeuroD表达也升高。

12.权利要求8的方法，其中与烟酰胺或exendin4相接触的细胞 的胰岛素表达量升高且超过表达Ngn3的细胞的胰岛素表达量。

13.权利要求8的方法，其中在将所述细胞与激活素A和一种抑 制音猬因子活性的试剂接触之前，将所述细胞首先只与激活素A接触。

14.一种使表达Oct-4和端粒酶且可以分化成外胚层、内胚层和 中胚层细胞类型的非胚胎干、非生殖、非胚胎生殖细胞分化的方法， 所述方法包含以下步骤：

a)将所述的非胚胎干、非生殖且非胚胎生殖细胞与一种第一试剂 相接触，其中所述第一试剂是激活素A，

b)将步骤a)中获得的细胞与激活素A和一种第二试剂相接触， 其中所述第二试剂抑制音猬因子活性；

c)将步骤b)中获得的细胞与EGF和/或HGF相接触；并

d)将步骤c)中获得的细胞与烟酰胺和/或exendin4相接触 从而产生表达胰岛素的细胞。

15.权利要求14的方法，其中步骤a)、步骤b)或者两者进一步 包含将所述细胞与BMP4相接触。

16.权利要求14或15的方法，其中步骤d)进一步包含将所述 细胞与GDF11和/或β-细胞素相接触。

17.权利要求1、8或14的方法，其中所述第二试剂是环巴胺或 一种抗SHH抗体。

18.权利要求5或6的方法，其中所述表达胰岛素的细胞分泌胰 岛素、C肽或者它们的组合。

19.权利要求18的方法，其中所述胰岛素是胰岛素-1。