[发明专利]嗜热球菌属某种(菌株9°N－7)DNA连接酶的发现、克隆和纯化无效
| 申请号： | 200680038387.3 | 申请日： | 2006-09-15 |
| 公开（公告）号： | CN101287828A | 公开（公告）日： | 2008-10-15 |
| 发明（设计）人： | I·希尔德克劳特;E·希尔德克劳特 | 申请（专利权）人： | 新英格兰生物实验室公司 |
| 主分类号： | C12N9/00 | 分类号： | C12N9/00 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 赵蓉民;陆惠中 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 球菌 某种 菌株 dna 连接酶 发现 克隆 纯化 | ||
1.基本上纯的重组蛋白质，其具有DNA连接酶活性，并且与SEQID NO：13具有至少91％的氨基酸序列同一性。
2.基本上纯的蛋白质，其具有DNA连接酶活性，由选自下列的DNA序列编码：
(a)与SEQ ID NO：2基本上相同的序列；
(b)与SEQ ID NO：2基本上互补的序列；
(c)在严格条件下，与SEQ ID NO：2杂交的序列；和
(d)编码SEQ ID NO：13的序列。
3.根据权利要求1所述的蛋白质，其中在大约100℃的温度下温育30分钟后，保留了至少25％的连接酶活性。
4.根据权利要求2所述的蛋白质，其中在大约100℃的温度下温育30分钟后，保留了至少25％的连接酶活性。
5.根据权利要求1、2、3或4所述的蛋白质，其在连接过程中利用ATP而不是NAD+作为辅因子。
6.编码DNA连接酶的DNA，所述DNA具有选自下列的序列：
(a)与SEQ ID NO：2基本上相同的序列；
(b)与SEQ ID NO：2基本上互补的序列；
(c)在严格条件下，与SEQ ID NO：2杂交的序列；和
(d)编码SEQ ID NO：13的序列。
7.载体，含有权利要求6所述DNA。
8.宿主细胞，其能表达权利要求1所述的蛋白质。
9.连接磷酸二酯键的方法，包括：
(a)选择根据权利要求1或2所述的连接酶；
(b)将所述连接酶与DNA混合，所述DNA在所述DNA的至少一条链上含有切点；和
(c)在所述切点连接所述磷酸二酯键。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述连接酶是从古细菌分离物得到的热稳定连接酶。
11.根据权利要求9所述的方法，其中所述古细菌分离物为嗜热球菌属某种(Thermococcus sp.)(菌株9°N-7)。
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