[发明专利]肽－免疫球蛋白缀合物

说明书

技术领域

本发明涉及肽-免疫球蛋白缀合物 (peptide-immunoglobulin-conjugate)，其中两个或者两个以上的肽被分 别缀合到免疫球蛋白的轻链或重链的一个末端。这些肽在氨基酸水平上可 以是不同的、相似的或者相同的。与肽缀合的免疫球蛋白是非功能性的免 疫球蛋白(not functionable immunoglobulin)。

发明背景

人免疫缺陷病毒(HIV)对细胞的感染通过病毒膜与将被感染的细胞 的细胞膜融合的过程而实现。对于此过程提出了一个一般性的模式：病毒 包膜糖蛋白复合物(gp120/gp41)与位于将被感染的细胞的细胞膜上的细 胞表面受体相互作用。gp120与例如CD4受体以及诸如CCR-5或CXCR-4 的共受体相结合，引起gp120/gp41复合物的构象的改变。这种构象改变 的结果是gp41蛋白能够插入到靶细胞的膜中。这种插入是膜融合过程的开 始。

已知由于天然发生的多态性，不同HIV株之间的gp41蛋白的氨基酸 序列不同。但是可以识别出相同的结构域构造，确切地，从N端到C端的 方向为融合信号、两个七肽重复序列结构域(HR1，HR2)和跨膜结构 域。据称该融合(fusion或fusogenic)结构域参与了插入细胞膜和细胞膜 的解体。该HR区由多段包括7个氨基酸(七肽)的序列构成(例如参见 Shu，W.，et al.，Biochemistry 38(1999)5378-5385)。除了七肽，还有 一个或多个类亮氨酸拉链基序。这个组成解释了gp41蛋白以及同样地衍生 自这些结构域的肽的卷曲螺旋结构的形成。卷曲螺旋通常是由两个或两个 以上相互作用的螺旋组成的寡聚物。

具有自gp41的HR1或HR2结构域推导的氨基酸序列的肽在体外和体 内是细胞摄取HIV的有效抑制剂(例如参见如US 5,464,933、US 5,656,480、 US 6,258,782、US 6,348,568或US 6,656,906中所述的肽)。例如，T20(也 称为DP178，，一种HR2肽)和T651(US 6,479,055)是非常有 效的HIV感染的抑制剂。

采用例如氨基酸替代或化学交联的方法，已经尝试增强HR2衍生肽的 效力(Sia，S.K.等，PNAS USA 99(2002)14664-14669；Otaka，A.等 Angew.Chem.Int.Ed.41(2002)2937-2940)。

肽缀合到某些分子上可以改变其药物代谢动力学性质，例如可以提高 这种肽缀合物的血清半衰期。报道的缀合物例如为：PEG化的白细胞介素 6(EP 0442724)、PEG化的促红细胞生成素(WO 01/02017)、包含内 皮抑制素和免疫球蛋白的嵌合分子(US 2005/008649)、基于分泌抗体的 融合蛋白(US 2002/147311)、包含白蛋白的融合多肽(US 2005/0100991、 人血清白蛋白US 5,876,969)、PEG化的多肽(US 2005/0114037)和干扰 素融合物。

这些方法的目的是融合例如多肽和免疫球蛋白以便组合免疫球蛋白的 抗原决定特性和多肽的生物活性。因此缀合物的免疫球蛋白部分展示靶向 功能，并且多肽部分提供生物活性。例如已经报道：包括白树毒素和抗体 的免疫毒素(WO 94/26910)、修饰的转铁蛋白-抗体融合蛋白(US 2003/0226155)、抗体-细胞因子融合蛋白(US 2003/0049227)和由具有免 疫刺激的、膜转运的或同嗜性的活性的肽和抗体组成的融合蛋白(US 2003/0103984)。

在WO 2004/085505中报道了由化学连接到大分子上的生物活性化合 物组成的长效的生物活性缀合物。

发明内容

本发明的目的是提供肽-免疫球蛋白缀合物，其中多于一个的肽缀合到 所述的免疫球蛋白上。

本发明包括肽-免疫球蛋白缀合物，其中该免疫球蛋白由两个重链或两 个重链和两个轻链组成，其中该免疫球蛋白是非功能性的免疫球蛋白，其 中通过肽键将免疫球蛋白链的羧基末端氨基酸缀合到肽的氨基末端氨基酸 上，或者将肽的羧基末端氨基酸缀合到免疫球蛋白链的氨基末端氨基酸上， 并且其中该缀合物具有下述的通式：

免疫球蛋白-[肽]_n

其中n是从2至8的整数。