[发明专利]用于诱导动脉粥样硬化斑块消退的免疫治疗

说明书

本发明涉及用于治疗心血管疾病的免疫疗法。

动脉粥样硬化是一种多因子病，尤其在存在生化风险因子(包括吸烟、 高血压、糖尿病、高胆固醇血症、高血浆低密度脂蛋白(LDL)和甘油三酯、 高纤维蛋白原血症和高血糖等)的人群中发生。动脉粥样硬化是慢性病，其 导致大动脉和中动脉的最内层(内膜)增厚。其减少血流量并且导致通过受 影响的血管供血的器官中的局部缺血和组织破坏。动脉粥样硬化病变在人 体中发展了许多年，导致诸如冠状动脉和脑部的局部缺血性和血栓性疾病 及心肌梗塞和脑梗塞的并发症。

动脉粥样硬化是心血管疾病(包括心肌梗塞，中风和外周动脉疾病)的 主要原因。心血管疾病是工业国家发病率和死亡率的主要原因并在新兴国 家中稳定发展，其中以冠状动脉硬化为主要的根本病理。目前的动脉粥样 硬化的治疗在防止发病和并发症上并非完全有效的。

疾病的发生是由脂蛋白，主要是LDL在血管的细胞外基质聚集。这些 LDL颗粒聚集并经氧化修饰。氧化的LDL是有毒的并且导致血管损伤。 动脉粥样硬化在很多方面表现为对这一损伤的反应包括发炎和纤维化。

胆固醇的高血浆水平，特别是LDL高水平通常被认为是动脉粥样硬化 发展的动力。而高密度脂蛋白(HDL)的高水平抵消了动脉粥样硬化的发展。 HDL因此被称为好的胆固醇而LDL被称为坏的胆固醇。简言之，LDL将 胆固醇转移到组织而HDL从组织吸收胆固醇并将其转移到肝脏，其在肝 脏被降解。降低LDL和增加HDL的治疗策略被开发用于动脉粥样硬化的 治疗。一个特别感兴趣并且有希望的策略涉及HDL突变的变体，叫做 ApoA-1_Milano。这种HDL变体非常有效地从组织转移胆固醇，并且动物实 验(Shah et al，1998)和临床试验的结果证明它可以引起动脉粥样硬化斑块 的负荷显著减少。

如WO 02/080954的背景技术中所总结的，Palinski et al(1989)在人体 中鉴定出抗氧化的LDL的循环型自体抗体。这一观察结果表明动脉粥样 硬化可能是一种自体免疫疾病，由抗氧化的脂蛋白的免疫反应引起。同时， 一些实验室开始在抗氧化的LDL的抗体滴度和心血管疾病中寻找关联。

发现抗氧化的LDL的抗体存在于心血管疾病的患者中，也存在于正常 人中。这引导研究者通过免疫动物抗它们自身的氧化的LDL来研究抗血 管壁中的氧化的LDL的自体免疫反应是否对动脉粥样硬化的发生有重要 作用。该方法之后的思路是如果使用传统的免疫技术强化了抗氧化的LDL 的自体免疫反应，其会导致血管发炎的增加和动脉粥样硬化的发展。为检 测这一假设，用同源氧化的LDL对兔进行免疫，然后通过16周用高胆固 醇饮食喂养动物增加动脉粥样硬化(Ameli et al，1996；Freigang et al，1998)。 然而，与最初的假设相反，用氧化的LDL免疫有积极效果，减少大约50％ 动脉粥样硬化的发生。在后来的研究中也获得了相似的结果，其中高-胆 固醇饮食与血管球囊损伤结合产生更强力的斑块形成(Nilsson et al，1997)。 综合可获得的数据来看，表明存在防止动脉粥样硬化形成的免疫反应并且 其包括抗氧化的LDL的自体免疫。

这些观察到的事实表明了开发免疫治疗或用于治疗人体中基于动脉 粥样硬化的心血管疾病的“疫苗”的可能性。一种方法，可以用他或她自 身的、经氧化的LDL免疫个体，例如与铜接触。

Palinski et al，(1995)和George et al，(1998)已经表明抗氧化的LDL的 免疫减少了动脉粥样硬化的发生。相似的，Zhou et al，(2001)证明与氧化形 式的LDL中发现的表位反应的抗体防止动物模型中动脉粥样硬化的形成。

WO 02/080954报道，用氧化形式的衍生自载脂蛋白B-100(ApoB-100) 的一些多肽接种倾向于形成动脉粥样硬化的动物，防止它们形成动脉粥样 硬化。以前的实验证明结合到LDL颗粒中氧化的表位的抗体(Schipou et al， 2004)防止动物模型中动脉粥样硬化斑块的形成。进一步，结合到氧化的 LDL的放射性同位素标记形式的抗体也可以用于实验动物中动脉粥样硬 化病变的放射免疫显像(Tsimikas et al，2000)。¹²⁵I标记的抗MDA赖氨酸表 位的抗体用于检测鼠和兔中的斑块，并且发现注射的抗体定位于主动脉的 斑块处。这表明抗氧化的LDL的免疫反应可能有保护作用。