[发明专利]浓缩、纯化和除去朊病毒蛋白质的方法

权利要求书

1.一种浓缩和/或纯化朊病毒PrP^Sc蛋白质和/或其功能衍生物的方 法，包括以下步骤：

a)在容许琼脂糖凝胶与朊病毒PrP^Sc蛋白质和/或其功能衍生物 的特异性的和高亲和性的结合的条件下使朊病毒PrP^Sc蛋白质和/或其功 能衍生物与琼脂糖凝胶接触，

b)从所述琼脂糖凝胶中除去未结合的非朊病毒蛋白质，

其中所述琼脂糖凝胶不是Cu²⁺螯合的琼脂糖。

2.一种从体液中除去朊病毒PrP^Sc蛋白质和/或其功能衍生物的方 法，包括以下步骤：

a)在容许琼脂糖凝胶与朊病毒PrP^Sc蛋白质和/或其功能衍生物 的特异性的和高亲和性的结合的条件下使包含朊病毒PrP^Sc蛋白质和/或 其功能衍生物的体液与琼脂糖凝胶接触，

b)从所述琼脂糖凝胶中除去所述体液。

3.权利要求2的方法，其中所述体液选自全血、血液级分或脑组织 匀浆，优选地选自血浆。

4.根据权利要求1到3中任一项的方法，其中所述琼脂糖凝胶选自 未连接的琼脂糖凝胶，优选地选自由琼脂糖凝胶琼 脂糖凝胶CL-琼脂糖凝胶Superdex聚丙烯酰胺葡聚糖 和交联葡聚糖凝胶构成的组。

5.根据权利要求1到4中任一项的方法，其中所述琼脂糖凝胶选自 配体修饰的琼脂糖凝胶，优选地选自由螯合金属的琼脂糖凝胶、凝集素 琼脂糖、亚氨基二乙酸琼脂糖凝胶、蛋白A琼脂糖、链霉抗生物素蛋白 琼脂糖凝胶、磺丙基琼脂糖凝胶和羧甲基琼脂糖凝胶构成的组，更优选 地选自螯合金属的琼脂糖凝胶，以及最优选地，所述琼脂糖凝胶是Zn- 琼脂糖凝胶。

6.一种从PrP^C蛋白质和/或其功能衍生物中分离和/或富集朊病毒 PrP^Sc蛋白质和/或其功能衍生物的方法，包括以下步骤：

a)在一定条件下使朊病毒PrP^Sc蛋白质和PrP^C蛋白质和/或其功 能衍生物与配体修饰的琼脂糖凝胶接触，所述条件容许

(i)所述琼脂糖凝胶部分与所述朊病毒PrP^Sc蛋白质和/或其功 能衍生物的特异性的和高亲和性的结合，以及

(ii)琼脂糖凝胶的所述配体部分与PrP^C蛋白质和/或其功能衍 生物的结合，

b)任选地从所述配体修饰的琼脂糖中除去未结合的材料，

c)任选地等待足够的时间，以便在紧密邻近朊病毒PrP^Sc蛋白质 和/或其功能衍生物处的某些或大多数与配体结合的PrP^C蛋白 质和/或其功能衍生物转变成朊病毒PrP^Sc蛋白质和/或功能衍 生物，

d)在一定条件下向来自步骤a)、b)或c)的与琼脂糖凝胶结合 的蛋白质和/或其功能衍生物中添加选择性释放试剂，所述条 件容许PrP^C蛋白质和任选的非朊病毒蛋白质从所述琼脂糖凝 胶的配体部分释放，但不容许朊病毒PrP^Sc蛋白质和/或其功能 衍生物从所述琼脂糖凝胶部分释放，以及

e)从所述琼脂糖凝胶中除去PrP^C和任选的非朊病毒蛋白质。

7.权利要求6的方法，进一步包括步骤：

f)从所述琼脂糖凝胶释放PrP^Sc朊病毒蛋白质和/或其衍生物。

8.权利要求7的方法，其中通过添加离液剂和/或洗涤剂，优选地添 加尿素和/或盐酸胍和/或SDS，更优选地添加尿素和/或SDS，最优选地 添加包含8M尿素和5％SDS的凝胶加载的缓冲液并施加电场来完成 PrP^Sc朊病毒蛋白质和/或其衍生物的释放。

9.权利要求5到8中任一项的方法，其中所述配体修饰的琼脂糖凝 胶是包含二价的固定的金属离子的金属螯合的琼脂糖凝胶。