[发明专利]修饰的伴侣蛋白10

说明书

技术领域

本发明涉及伴侣蛋白10的多肽和编码该多肽的核酸。本发明还涉 及显示免疫调节活性的伴侣蛋白10的多肽、所述多肽的使用方法以及 包括所述多肽的组合物。

技术背景

哺乳动物伴侣蛋白10(Cpn10)，也称为热休克蛋白10(Hsp10)和早 孕因子(EPF)，通常以作为线粒体“分子伴侣”蛋白为特征，与伴侣蛋白 60(Cpn60；Hsp60)一起参与蛋白质的折叠。Cpn10和Cpn60分别是细 菌蛋白GroES和GroEL的同系物。GroES和Cpn10各自低聚成七元 环，所述七元环作为盖子分别结合到包括14个GroEL或7个Cpn60 分子的桶状结构上，这样将变性蛋白拴成复合体(Bukau and Horwich， 1998，Cell 92：351-366；Harti and Hayer-Hartl，2002，Science 295：1852-1858)。

Cpn10蛋白在物种间高度保守。人Cpn10与牛Cpn10有100％的 一致性，与大鼠Cpn10仅在一个氨基酸位置处不同。人Cpn10与大肠 杆菌(Escherichia coli)GroES共有30％序列一致性(60％相似性)。如大 肠杆菌(E.coli)GroES的七聚物晶体结构所显示的(参见图1A；Xu et al.， 1997，Nature 388：741-750)。Cpn10/GroES蛋白基本上由三个不同的结 构域组成：一个反向平行的β-桶区，位于β-桶区两侧的一个“顶部 (roof)”β-发夹环区和一个“可移动环”区。可移动环区调节与 Cpn60/GroEL的相互作用，因此对形成与Cpn60/GroEL的复合物和“分 子伴侣”(蛋白折叠活性)是关键的。

然而，Cpn10除了作为分子伴侣的胞内作用外，也常见于细胞表 面(参见Belles et al.，1999，Infect lmmun 67：4191-4200)和胞外液体中(参 见Shin et al.，2003，J BIol Chem 278：7607-7616)，并且逐渐被认为是免 疫反应的调节剂。例如已证明Cpn10在实验性自身免疫性脑脊髓炎、 迟发型超敏反应以及同种异体移植物排斥模型中具有免疫抑制活性 (Zhang et al.，2003，J Neurol Sci 212：37-46；Morton et al，2000，Immunol Cell Biol 78：603-607)。

最近本发明的发明人还证实了Cpn10在许多不同的人与鼠体外系 统和鼠疾病模型中可抑制LPS诱导的NF-κB活化、减少LPS诱导的 TNFα和RANTES分泌以及促进IL-10产生(Johnson et al.，2005，J Biol Chem 280：4037-4047和国际专利申请PCT/AU2005/000041，其公开内 容通过引用并入本申请)，表明Cpn10具有相当大的潜能作为治疗自身 免疫性疾病和炎性疾病的免疫治疗剂。

然而，负责调节所述免疫调节活性的Cpn10分子的位置还不清楚。

本发明涉及对Cpn10分子的修饰以及这些修饰对免疫调节活性的 作用。

发明概述

因此，本发明提供了与野生型Cpn10相比包括一个或多个氨基酸 取代、删除和/或添加的Cpn10多肽，所述多肽显示免疫调节活性。

本发明第一方面提供了具有免疫调节活性但没有或大体上没有蛋 白折叠活性的分离的Cpn10多肽。

本发明第二方面提供了一种具有免疫调节活性的分离的Cpn10多 肽，与对应的野生型Cpn10多肽相比，所述多肽包括可移动环区的一 个或多个氨基酸取代、删除和/或添加。

所述Cpn10多肽可显示至少类似于对应的野生型Cpn10多肽的免 疫调节活性水平的免疫调节活性。

在一个实施方案中，Cpn10多肽可移动环区IML三肽的一个或多 个残基可被带电残基替代。

在另一个实施方案中，包括IML三肽的Cpn10多肽被三肽EEE 替代。SEQ ID NO：39给出了包括EEE三肽的Cpn10多肽。SEQ ID NO： 40给出的核苷酸序列编码所述Cpn10多肽。

在又一个实施方案中，包括IML三肽的Cpn10多肽被三肽III替 代。SEQ ID NO：37给出了包括III三肽的Cpn10多肽。SEQ ID NO：38 给出的核苷酸序列编码所述Cpn10多肽。