[发明专利]用于分析物检测的比色生物条形码扩增测定

权利要求书

1.检测目标分析物的方法，包括步骤：

(a)提供怀疑含有所述目标分析物的样品；

(b)将(I)包括特异性结合所述目标分析物的第一配体和条形 码寡核苷酸的多孔微粒探针和(II)包括特异性结合所述目标分析物 的第二配体的磁性颗粒探针接触所述样品，并使所述多孔微粒探针和 所述磁性颗粒探针结合所述目标分析物，如果所述样品中存在所述目 标分析物，在所述多孔微粒探针和所述磁性颗粒探针之间形成复合物；

(c)从所述样品中分离所述复合物；

(d)从所述复合物释放并收集所述条形码寡核苷酸；和

(e)检测所述条形码寡核苷酸。

2.权利要求1的方法，其中所述目标分析物选自核酸，蛋白质， 肽，金属离子，半抗原，药物，代谢物，杀虫剂和污染物。

3.权利要求1的方法，其中所述目标分析物是细胞因子。

4.权利要求1的方法，其中所述目标分析物是趋化因子。

5.权利要求1的方法，其中所述多孔微粒探针包括选自聚苯乙烯， 纤维素，硅石，氧化铁，聚丙烯酰胺，多糖，葡聚糖，琼脂糖和纤维 素的材料。

6.权利要求5的方法，其中用胺修饰所述多孔微粒探针。

7.权利要求1的方法，其中所述微粒具有约0.1微米至约5000 微米的大小。

8.权利要求1的方法，其中所述微粒具有约0.5微米至约10微 米的大小。

9.权利要求1的方法，其中所述微粒具有约3微米至约5微米的 大小。

10.权利要求1的方法，其中所述多孔微粒探针具有约50埃至约 150埃的孔径大小。

11.权利要求1的方法，其中所述多孔微粒探针具有约90埃至约 110埃的孔径大小。

12.权利要求1的方法，其中所述多孔微粒探针具有约300m²/g 至约500m²/g的表面积。

13.权利要求1的方法，其中所述多孔微粒探针具有约400m²/g 至约450m²/g的表面积。

14.权利要求1的方法，其中所述条形码寡核苷酸选自基因，病 毒RNA和DNA，细菌DNA，真菌DNA，哺乳动物DNA，cDNA，mRNA，RNA 和DNA片段，天然和合成的核酸，以及适体。

15.权利要求14的方法，其中用可检测的标记修饰所述条形码寡 核苷酸。

16.权利要求15的方法，其中所述可检测的标记选自生物素，放 射性标记，荧光标记，发色团，氧化还原活性基团，具有电特征的基 团，催化基团和拉曼标记。

17.权利要求1的方法，其中所述条形码寡核苷酸和所述微粒是 通用探针的成员。

18.权利要求1的方法，其中所述配体是单克隆或多克隆抗体。

19.权利要求1的方法，其中步骤(e)是比色测定。

20.权利要求19的方法，其中所述比色测定包括通过以下步骤检 测所述条形码寡核苷酸：

(i)提供包括第一和第二颗粒探针的溶液，其中所述第一颗粒探 针包括与所述条形码寡核苷酸的一个末端互补的捕获寡核苷酸，并且 其中所述第二颗粒探针包括与所述条形码寡核苷酸的另一相对末端互 补的捕获寡核苷酸；

(ii)将所述条形码寡核苷酸接触步骤(i)的所述溶液并使所述 条形码寡核苷酸与所述第一和第二颗粒探针杂交，借此所述第一和第 二颗粒探针聚集成聚集物，其中溶液中的颜色改变表示所述聚集物的 形成；和

(iii)检测所述溶液中的所述颜色改变。