[发明专利]提高植物转化效率的载体和方法

权利要求书

1.用于转化植物的DNA构建体，含有：

i)至少一个T-DNA边缘区域；

ii)至少一个与边缘区域邻接的异源转基因；

iii)细菌选择性标记的编码区域；及

iv)至少一个DNA节段，含有在可转化至少一个初始植物细胞 的细菌中维持低拷贝数DNA构建体的复制起点的顺式和/或反式元 件。

2.如权利要求1所述的DNA构建体，其中所述的至少一个T-DNA 边缘区域是右侧边缘区域或左侧边缘区域。

3.如权利要求1所述的DNA构建体，其中异源转基因在转化的植 物细胞中表达时可使该细胞或由该细胞衍生的转化植物呈现某种农 艺学表型。

4.如权利要求1所述的DNA构建体，其中细菌选择标记的编码区 包括选自卡那霉素抗性基因、庆大霉素抗性基因、氯霉素抗性基因、 壮观霉素抗性基因、链霉素抗性基因、四环素抗性基因、氨苄青霉素 抗性基因、杀稻瘟素抗性基因、潮霉素抗性基因、嘌呤霉素抗性基因 和零霉素抗性基因的抗生素抗性基因。

5.如权利要求1所述的DNA构建体，其中复制起点包括repABC 起点。

6.如权利要求5所述的DNA构建体，其中repABC起点选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3以及SEQ ID NO：4。

7.如权利要求1所述的DNA构建体，其中所述的至少一个DNA 节段含有复制起点基因repA、repB和repC。

8.如权利要求1所述的DNA构建体，其中所述的至少一个DNA 节段含有基因间序列1(igs1)和基因间序列2(igs2)。

9.如权利要求1所述的DNA构建体，其中所述的至少一个DNA 节段含有16个碱基对的回文序列。

10.如权利要求1所述的DNA构建体，其中所述的细菌选自： 土壤杆菌(Agrobacterium spp.)、根瘤菌(Rhizobium spp.)、中华根 瘤菌(Sinorhizobium spp.)、中间根瘤菌(Mesorhizobium spp.)、叶 杆菌(Phyllobacterium spp.)、苍白杆菌(Ochrobactrum spp.)和慢生 根瘤菌(Bradyrhizobium spp.)。

11.如权利要求1所述的DNA构建体，其还含有至少一个维持 构建体在大肠杆菌中的拷贝数的第一复制起点。

12.如权利要求11所述的DNA构建体，其中复制起点来源于 pBR322和/或pUC。

13.用如权利要求1所述的DNA构建体转化的细胞。

14.如权利要求13所述的细胞，其为植物细胞。

15.如权利要求13所述的细胞，其为细菌细胞。

16.如权利要求15所述的细菌细胞，其中所述细胞可转化至少 一种初始植物细胞。

17.如权利要求16所述的细菌细胞，其中细菌选自土壤杆菌、 根瘤菌、中华根瘤菌、中间根瘤菌、叶杆菌、苍白杆菌和慢生根瘤菌。

18.转化植物细胞的方法，包括将如权利要求16所述的细菌细 胞与至少一种初始植物细胞相接触，其中细菌细胞可转化所述的初始 植物细胞；及根据是否存在至少一种通过细菌细胞引入到植物细胞中 的异源转基因来筛选所述的初始细胞。

19.如权利要求18所述的方法，其中植物细胞是大豆、油菜、 玉米或棉花植物的细胞。

20.如权利要求18所述的方法，进一步包括从植物细胞再生出 植株。

21.产生食品、饲料或工业产品的方法，包括：获得如权利要求 20所述的植物或其部分，并从该植物或其部分制备食品、饲料或工业 产品。