[发明专利]外部志贺菌蛋白F（OSPF）的治疗用途

说明书

本申请要求申请日为2005年9月15日的美国临时申请60/716,931的 优先权，通过引用将该申请并入本申请。

技术领域

本发明涉及多种新一类的双特异性磷酸酶、使用所述磷酸酶治疗疾病 的方法、鉴定调变所述磷酸酶的活性的药剂的方法、鉴定模拟所述磷酸酶 的活性的药剂的方法、调节免疫应答的方法、和包含所述磷酸酶的免疫原 性组合物。本发明还涉及含有灭活的ospF基因的弗氏志贺菌(Shigella flexneri)菌株、以及包含含有灭活的ospF基因的弗氏志贺菌菌株的疫苗。

背景技术

弗氏志贺菌是革兰氏阴性病原菌，其通过感染人的结肠上皮细胞而引 起杆菌性痢疾。志贺菌主要感染肠道上皮细胞(IEC)(Jung et al.，1995)。志 贺菌表达数种蛋白质，这些蛋白质提供一种递送效应物的机制，所述效应 物诱导细菌通过吞噬作用被摄入宿主细胞。这些蛋白质形成III型分泌系 统(TTSS)，并由一220-kb的侵袭性质粒(virulence plasmid)编码。然后， 志贺菌通过裂解吞噬泡而得以进入胞浆，而后表达运动表型，以便能够感 染附近的其他细胞。

为了成功实现感染，志贺菌必须精细调节宿主的免疫应答，特别是那 些导致炎症的应答。不同于鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)的是， 志贺菌不能有效侵入极化IEC的顶极，而是需要多形核白细胞(PMN)的移 行才能突破上皮细胞屏障，通过上皮细胞的基底外侧极促进侵入细胞 (Perdomo et al.，1994)。由天然免疫系统的细胞促进的宿主炎性应答将PMN 吸引至炎症部位。因此，在感染的早期引发炎症对于志贺菌侵入细胞是必 需的。到达IEC的细胞内部分的细菌抗生长并从细胞至细胞进行传播，从 而躲避宿主的免疫防御。但被感染的IEC在炎症过程中发挥很大的作用， 既是侦查细菌侵入的哨兵，又是介质的主要来源，特别是那些介导炎症应 答的细胞因子和趋化因子的主要来源。这些介质包括那些触发粘膜炎症并 使之全面发作的细胞因子和趋化因子(Jung et al.，1995)。IEC主要是在细胞 内通过胞浆分子Nod1/CARD4对细菌加以识别，Nod1/CARD4能够发现一 种微生物基序，即肽聚糖(Girardin et al.，2003)。Nod1的活化诱导其他促 炎信号途径，包括NF-κB和c-Jun N-端激酶(JNK)，导致表达趋化因子 (Philpott et al.，2000)，例如白细胞介素-8(IL-8)。这些趋化因子对于清除病 原体至关重要(Sansonetti et al.，1999)。因此，引发过度的炎症可危及志贺 菌在宿主中的存活。为了存活，此类细菌已经进化出用于调变促炎基因转 录的策略。

尽管植物和动物病原体已经产生了多种抑制免疫力的策略，但通过 TTSS的效应分子移位仍是许多细菌病原体控制宿主天然免疫应答的机 制。已经发现志贺菌的III型分泌型OspG分子通过阻断IκB-α的遍在蛋白 化而拮抗IκB-α的降解，表明该微生物具有调节炎症应答的能力(Kim et al.， 2005)。来自假结核耶尔森氏菌(Yersinina pseudotuberculosis)的TTSS效应 物如YopE、T和H主要针对肌动蛋白聚合作用而逃脱吞噬作用(Cornelis， 2002)，而其他TTSS效应物抑制由天然免疫应答介导的促炎防御应答。对 于后者，这些效应物多为半胱氨酸蛋白酶，它们针对的是防御信号途径的 重要组分。例如，丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)效应物AvRpt2可 消除拟南芥属(Arabidopsis)RIN4蛋白(一种基本防御(basal defence)的调 节剂)(Axtell and Staskawicz，2003)。其他效应物诱导可逆性的蛋白质修 饰：YopJ/P/AvrBsT代表半胱氨酸蛋白酶家族，其自靶蛋白裂解遍在蛋白 样蛋白SUMO的羧基端，且由此干扰多种信号途径(Orth et al.，2000)。 YopJ还乙酰化多种激酶的活化环结构域，由此干扰多种信号途径 (Mukherjec et al.，2006)。目前还不清楚这些效应物如何改变特定宿主基因 的表达的机制。

发明内容