[发明专利]测定抗原的方法和用于其的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及测定抗原的方法和用于其的试剂盒。更具体地，本发明涉及通过均匀体系中的竞争性免疫凝集测定法测定样品中抗原的方法，其中该方法适合于测定抗原例如白蛋白，一种以高浓度存在于生物样品中的蛋白质，并且涉及用于所述方法的试剂盒。 

背景技术

已知比浊免疫测定法例如胶乳比浊免疫测定法为测定存在于血液样本中的蛋白质的方法之一。因为这种方法能够在短时间内测定大量样本，它们被广泛用于实验室检验领域。然而，在使用这种方法尝试测定以约10-3M的高浓度存在于血液中的蛋白质例如白蛋白时，产生了各种问题。特别地，在那种情况下，测定前的操作是复杂的，因为必须在使用前将作为样本收集的血液分析物稀释。此外，这种方法需要使用大量的抗体作为测量试剂，使得测量试剂成本更高。另外，容易发生前带现象，因此在高浓度区域测定也许是不可能的。结果是，通过比浊免疫测定法测定未稀释体系中的蛋白质还未用于实际应用。 

同时，与比浊免疫测定法相关联，已知均匀体系中的竞争性免疫凝集测定法为免疫测定法之一(专利文件1、2和3)。均匀体系中的竞争性免疫凝集测定法是基于细颗粒上带有的抗原与抗体之间的抗原-抗体反应所产生的凝集程度而定量测定被测抗原的方法，该方法包括以下步骤：将包含被测抗原的样本、针对该抗原的抗体、和带有能够 结合于该抗体的抗原的细颗粒混合，和使样品中的抗原和细颗粒带有的抗原之间竞争与抗体的抗原-抗体反应。这个方法的优点在于可以通过各种努力测定低浓度的抗原，因此研究是从这个视角进行的。然而，在使用这个方法测定高浓度的蛋白质时，在生成校正曲线时，当被测蛋白质的浓度为0时，测量空白超过可测量的上限。因此，测定变得不可能。因此，几乎没有研究来通过这个方法测定高浓度蛋白质，结果是，该方法仍未用于实际应用。 

专利文献1：JP-A-57-206859专利文献2：JP-A-58-500874专利文献3：JP-A-2002-296281 

发明公开

因此，本发明涉及使用通常很少用于测定高浓度的抗原的、均匀体系中的竞争性免疫凝集测定法测定未稀释体系中的抗原的方法，和涉及用于该测定方法的试剂盒。 

在这种情况下，为了解决这些问题，本发明人对从未从测定高浓度蛋白质的方面考虑过的、通过均匀体系中的竞争性免疫凝集测定法测定样本中的白蛋白进行了研究。结果，意外地发现，当将共价结合于水溶性聚合物的抗体用作均匀体系中竞争性免疫凝集测定法的抗体时，可以不依靠稀释准确地测定未稀释体系中的高浓度白蛋白。由此完成了本发明。 

因此，本发明涉及通过均匀体系中的竞争性免疫凝集测定法测定抗原的方法，包括以下步骤：将包含被测抗原的样品、针对该抗原的抗体、和带有与被测抗原相同的抗原或该抗原类似物的细颗粒混合，所述类似物可以与所述抗体发生抗原-抗体反应；使样品中的抗原和细颗粒带有的与被测抗原相同的抗原或细颗粒带有的抗原类似物之间竞争与抗体的抗原-抗体反应；和基于抗体与细颗粒带有的与被测抗原相同的抗原或细颗粒带有的抗原类似物的抗原-抗体反应所产生的凝集程度定量地测定被测抗原，所述方法的特征在于抗体共价结合于水溶性聚合物。 

此外，本发明涉及用于测定抗原的试剂盒，包括针对被测抗原的抗体和细颗粒，所述抗体共价结合于水溶性聚合物，所述细颗粒带有与被测抗原相同的抗原或该抗原的类似物，所述类似物可以进行与抗体的抗原-抗体反应。 

本发明的测定方法可以进行以高浓度存在于生物样品中的蛋白质抗原例如白蛋白的免疫测定法而不发生前带现象、以及无须稀释样本、少量使用作为测量试剂的昂贵的抗体。 

附图简述

图1表示通过本发明的方法制备的校正曲线；图2表示本发明的方法与TIA方法之间的相关性的血清白蛋白测量结果。 

发明详述