[发明专利]细胞保存用水溶液

说明书

技术领域

本发明涉及能通过简单操作长期保存细胞的细胞保存用水溶液，和更具体地，涉及无天然动物源组分例如基础培养基或血清的细胞保存用水溶液。

背景技术

通常，为防止培养的细胞因连续传代而劣化和被细菌污染进行深低温保藏以便能长期使用该细胞。已知用于细胞保存的通常方法是在液氮(-196℃)中通过以下保存细胞的方法：在含有二甲亚砜(下文中，称为DMSO)和血清的培养基中悬浮该细胞；在冷冻管或安瓿中分配该悬浮液；并用程序冷冻机冷却该悬浮液。

依赖于要保存的细胞的类型已经制备了深低温保藏用保存溶液的各种组合物。例如，已经发展了深低温保藏用无血清培养基用于在无血清的培养基中培养的培养细胞(例如见专利文件1)。此外，深低温保藏用溶液的质量因不同的血清种类而改变。此外，本质上不需要的细胞保存用组分，例如包含在血清中的各种细胞因子、生长因子和荷尔蒙可改变保存细胞的性质，因而已经发展了不使用血清的深低温保藏用溶液(例如见专利文件2)。

然而，在专利文件1中公开的无血清深低温保藏溶液包括包含多种组分的基础培养基。例如，RPMI1640培养基包含很多来源不明确的氨基酸。也还不知道这些培养基组分对保存细胞的影响。此外，在专利文件2中使用纯化过的白蛋白。然而，依赖于白蛋白提纯的程度其还可能被各种组分污染，因而仍然存在关于对细胞的影响的问题。

考虑到对保存在含有血清或基础培养基的溶液中的细胞潜在的影响，特别是用于医学使用，期望发展无天然动物源组分的化学上定义明确的细胞保存溶液。这种细胞保存溶液包括来源明确的组分，因而，期待其具有使该溶液的质量保持不变的优点。

不幸地，传统的细胞保存溶液需要基础培养基、血清或血清替代品，例如血清白蛋白，纯化过的白蛋白和类似物以进行长期和稳定的细胞保存。因此，至今还没有得到完全无天然动物源组分的细胞保存溶液。

专利文件1：JP63-216476A

专利文件2：JP2002-233356A

发明内容

本发明所要解决的问题

本发明的目的是提供一种无天然动物源组分例如基础培养基或血清的细胞保存用水溶液。本发明的另一目的是提供使所述水性保存溶液的细胞保存方法。

解决问题的手段

作为为解决以上问题的深入研究的结果，通过发现通过调节其他组分和其浓度排除任何天然动物源组分例如基础培养基或血清允许细胞保存后显示高存活率的一种水性保存溶液本发明的发明人最后完成了本发明。此外，通过用本发明的水性保存溶液制备细胞，发明人还完成了细胞保存方法。

本发明涉及使用根据以下项(1)至(17)中任一项所述的细胞保存用水溶液的细胞保存方法：

(1)细胞保存用水溶液，包含：增稠剂、防冷冻剂和糖，和无天然动物源组分；

(2)根据以上项(1)所述的细胞保存用水溶液，进一步包含：pH调节剂；

(3)根据以上项(1)或(2)所述的细胞保存用水溶液，其中该天然动物源组分是血清和源自基础培养基的组分；

(4)一种细胞保存用水溶液，包括以下组成(a)至(e)并具有pH6.5至9.0：

(a)1.0至20.0w/v％的防冷冻剂；

(b)1.0至10.0w/v％的糖；

(c)0.1至1.0w/v％的增稠剂；

(d)0.01至1.0w/v％的pH调节剂；和

(e)适量水；

(5)根据以上项(1)至(4)中任一项所述的细胞保存用水溶液，其中渗透压为1,000mOsm以上；

(6)根据以上项(5)所述的细胞保存用水溶液，其中该渗透压为1,000至2,700mOsm；

(7)根据以上项(1)至(6)中任一项所述的细胞保存用水溶液，其中该增稠剂包括羧甲基纤维素(CMC)，羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，或有机酸聚合物；

(8)根据以上项(7)所述的细胞保存用水溶液，其中该有机酸聚合物为聚丙烯酸钠；

(9)根据以上项(1)至(8)中任一项所述的细胞保存用水溶液，其中该防冷冻剂为二甲亚砜(DMSO)或丙二醇；

(10)根据以上项(1)至(9)中任一项所述的细胞保存用水溶液，其中该糖为葡萄糖；