[发明专利]用微生物纯化粗萘二甲酸的方法和用该方法得到的结晶形式的2,6－萘二甲酸

权利要求书

1.一种用微生物纯化粗萘二甲酸的方法，该方法包含以下步骤：

(a)使具有将2-甲酰基-6-萘甲酸转化成2，6-萘二甲酸的能力的微生物与粗萘二甲酸反应以去除包含在粗萘二甲酸中的2-甲酰基-6-萘甲酸；

(b)向步骤(a)中制备的反应液中加入酸性溶液以调节反应液的pH，并且通过搅拌使混合液反应以使粗萘二甲酸结晶；

(c)洗涤结晶的粗萘二甲酸以去除含在结晶的粗萘二甲酸中的杂质；和

(d)干燥洗涤后的产物以得到纯的结晶形式的2，6-萘二甲酸。

2.依据权利要求1的方法，其中步骤(a)包括以下子步骤：

1)将微生物接种在液体培养基上，振摇培养接种体，通过离心收集培养的细菌，并在生理盐水或蒸馏水中悬浮收集的细菌以使细菌活化；

2)将作为基质的粗萘二甲酸(cNDA)与缓冲液混合，通过添加碱性溶液调节混合液的pH以制备用于随后纯化的反应液；和

3)将在1)中制备的活性细菌与在2)中制备的反应液反应以将含在粗萘二甲酸中的2-甲酰基-6-萘甲酸转化成2，6-萘二甲酸，从而提高2，6-萘二甲酸的纯度。

3.依据权利要求2的方法，其中所述微生物是属于芽孢杆菌属或假单胞菌属的细菌。

4.依据权利要求3的方法，其中所述微生物是芽孢杆菌F-1(KCTC-10342BP)、芽孢杆菌F-3(KCTC-10335BP)或假单胞菌HN-72(KCTC-10819BP)。

5.依据权利要求2的方法，其中所述缓冲液从由水、碳酸钠缓冲液(Na₂O₃/NaHCO₃)、甘氨酸缓冲液(甘氨酸/NaOH)、磷酸钾缓冲液(KH₂PO₄/KOH)、磷酸钠缓冲液(Na₂HPO₄/NaH₂PO₄)、丁二酸缓冲液(丁二酸/NaOH)、醋酸钠缓冲液(醋酸钠/醋酸)、柠檬酸缓冲液(柠檬酸/柠檬酸钠)、焦磷酸钠缓冲液(Na₄P₂O₇/HCl)、硼酸缓冲液(硼酸/NaOH)、硼酸钠缓冲液(硼酸钠/HCl)以及它们的混合物组成的组中选出；并且所述缓冲液的浓度为0.01～100mM。

6.依据权利要求2的方法，其中所述碱性溶液为NaOH或KOH溶液。

7.依据权利要求2的方法，其中所述混合液还包含有机溶剂。

8.依据权利要求7的方法，其中所述有机溶剂从由二甲基亚砜、N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、四氢呋喃以及它们的混合物组成的组中选出；并且所述有机溶剂以0.01～10％的浓度添加。

9.依据权利要求2的方法，其中所述反应在25～50℃下进行1分钟～2小时。

10.依据权利要求1的方法，其中所述酸性溶液从由硫酸、盐酸、冰醋酸、硝酸以及它们的混合物组成的组中选出。

11.依据权利要求1的方法，其中所述反应液的pH调节到1～4。

12.依据权利要求1的方法，其中所述反应在4℃～80℃下进行1分钟～12小时。

13.依据权利要求1的方法，其中所述搅拌以0～1000rpm的速率进行。

14.依据权利要求1的方法，其中步骤(c)通过将结晶的cNDA分散在水中，在1～28kg/cm²的压力和100～250℃的温度下搅拌10分钟～1小时，过滤结晶的cNDA以除去水，并重复上述工序来进行。

15.依据权利要求1的方法，其中所述干燥在30～200℃下进行。

16.依据权利要求1的方法，还包含在步骤(a)后和步骤(b)前除去在步骤(a)中使用的微生物的步骤。

17.依据权利要求16的方法，其中微生物的去除通过微量过滤器系统、连续型离心分离器或滗析器完成。