[发明专利]采用降低的温度产生树突细胞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于诱导抗恶性肿瘤和感染疾病的免疫反应的方法 和装置。更具体地，本发明涉及用于产生抗原呈递细胞的改良方法。

背景技术

利用抗原呈递自然机制的基于树突细胞的免疫疗法代表了最有 前景的非毒性癌症治疗方法。其可以作为单独治疗，或者作为其他 类型疗法(例如外科手术、放射和化疗)的辅助。该策略基于细胞 产物的体外操纵和再导入来绕过免疫功能，目的是诱导肿瘤特异性 的免疫反应。因此，这种基于树突细胞的免疫疗法的终极终极目标 是体内诱导肿瘤特异性效应细胞，近期进展集中于能够识别并杀伤 肿瘤细胞的CD8+细胞毒T淋巴细胞(CTL)。另外，感染疾病例如 HIV的治疗可以受益于基于树突细胞的接种策略。

抗原呈递

肿瘤特异性免疫反应的诱导，需要表达主要组织相容性复合物 (MHC)分子以及膜结合并分泌的共刺激分子的专业抗原呈递细胞 (APC)的参与。而且，这种APC必须能够吸收、加工并呈递与MHC 结合的抗原。

树突细胞(DC)是免疫系统的专业APC，其具有刺激幼稚T细 胞和记忆T细胞的能力。导致DC成熟的阶段与细胞的某些性质有 关。未成熟DC特别善于通过吞噬或胞饮作用吸收细胞外抗原，并 在细胞内区室例如内体和吞噬体中将抗原加工成肽。这里，肽与II 类MHC分子结合。未成熟的DC还具有将肽从外源蛋白质负载至I 类MHC分子呈递途径的独特能力，一种被称为交叉呈递的过程。

通过激活1型CD4+辅助性T细胞(Th1细胞)和CD8+细胞毒性 T细胞(CTL)而有效刺激免疫反应的能力关键依赖于成熟DC。只有 具有一系列膜结合共刺激分子和辅助分子(例如CD40，CD80，CD83， CD86和II类MHC)的完全成熟的DC才可能有效诱导抗原特异性 T淋巴细胞的繁殖和分化¹。

DC的共刺激活性的重要作用由分泌的细胞因子、特别是 IL-12p70来提供。Heufler等(1996)¹清楚证明了其在T细胞活化中的 作用以及其偏向Th1型反应。而且，Inoue等(2005)报道了肿瘤中表 达IL-12的成熟DC的存在与患者存活之间的良好相关性。用于接种 的成熟DC应该产生有限量的Th1细胞抑制性细胞因子IL-10。

CCR7是淋巴结中基底细胞产生的趋化因子CCL19和CCL21的 受体。表达足够水平的活化CCR7的DC响应CCL19或CCL21²而 迁移至淋巴结。这里，它们遇到T淋巴细胞并可以引发免疫反应。

产生成熟DC的方案

已经描述了用于产生成熟DC的许多方案。目前用于诱导DC的 最普遍使用的“标准”方案采用由IL-1β，IL-6，TNF-α和前列腺素E2 组成的成熟鸡尾酒。尽管有归因于CCR7的迁移活性和体内免疫刺 激活性，但是由该鸡尾酒成熟的DC产生了IL12p70³生成能力降低 的DC。

另一组DC成熟方案包括聚肌苷：聚胞苷酸，聚-(I:C)。其通常与 细胞因子例如TNFα、IL-1β、IFN-γ和IFN-α结合使用。该方法产生 的DC生成IL-12p70，但是它们通常表达低水平的CCR7。聚-(I:C) 存在下获得的DC的低水平CCR7表达特征，限制了它们在体内迁 移至淋巴结。

近来，公布的专利申请US2005/0003533A1公开了表达CCR7 的树突细胞的成熟方法，所述树突细胞在CD40L刺激后能够被诱导 产生IL-12p70。

因此，依然存在对开发用于产生如下成熟树突细胞的标准化方 法的未满足的要求：表达高水平的活化CCR7，并同时产生足量的 IL-12p70。

而且，尽管许多研究者的努力，但是用于癌症疗法的基于树突 细胞的疫苗一般提供了最温和临床效力的免疫反应。这些疫苗主要 通过自体DC的体外操纵和抗原负载来产生。日益增加的对患者安 全性的需求，要求高水平的重复性和符合管理内容的顺应性。因此， 强烈需要正确产生装配DC的方法，所述DC有效诱导免疫反应并特 别提供改良的临床反应。