[发明专利]体内和体外再生细胞的方法

权利要求书

1.一种再生年老细胞的方法，其包括下列步骤：

a.提供包含年老体细胞的样品；

b.提供包含再生提取物、白蛋白、ATP、磷酸肌酸、肌酸激酶、核糖核酸 酶抑制剂以及核苷酸磷酸盐的再生溶液；

c.将所述年老细胞与所述再生溶液混合并且培养足以使所述再生溶液的成 分透过细胞的时间；和

d.加入细胞培养基、氯化钙和任选抗生素的溶液，籍此产生再生的细胞；

所述再生提取物采用包括如下步骤的方法制备：(1).提供新生细胞，ESC， 组织干细胞，卵或者从小鼠胚胎、小鼠胎儿、小鼠胎儿组织获得的细胞；(2).分 离待提取的细胞；(3).对细胞进行至少两个冻融循环；(4).以高速离心细胞；和， (5).抽取含有再生因子的上清液；

或者所述再生提取物采用包括如下步骤的方法制备：(1).提供新生细胞， ESC，组织干细胞，卵或者从小鼠胚胎、小鼠胎儿、小鼠胎儿组织获得的细胞； (2).分离待提取的细胞，包含小鼠胎儿细胞和/或小鼠ESC；(3).在低渗缓冲液 中裂解细胞；(4).离心以分离除去缓冲液；(5).对剩余的细胞核进行至少两个冻 融循环；(6).离心以获得细胞核的提取物；

所述细胞培养基为KO-DMEM或DMEM。

2.根据权利要求1的方法，其中，所述再生的细胞是自体细胞。

3.根据权利要求1的方法，其中，所述培养基包含bFGF和TGF-βl。

4.权利要求1的方法，其中，所述再生提取物是从发育早期的细胞中提取 的，所述的细胞选自卵、受精卵、小鼠胚胎、脐带血干细胞、组织特异性干细 胞、干细胞原始生殖细胞、小鼠胎儿、小鼠胚胎干细胞、小鼠特定胎儿组织或 者其组合。

5.权利要求4的方法，其中，所述再生提取物是从细胞或者含有细胞核的 细胞部分中提取的。

6.权利要求4的方法，其中，所述再生提取物是从处于细胞周期任何阶段 的细胞或细胞核或者从处于细胞周期多个阶段的多个细胞或细胞核中获得的。

7.权利要求4的方法，其中，所述小鼠特定胎儿组织是肝脏。

8.一种将细胞再生为多潜能胚胎干样细胞的方法，其包括：

a.提供包含年老体细胞的样品；

b.提供包含再生提取物、白蛋白、ATP、磷酸肌酸、肌酸激酶、核糖核酸 酶抑制剂以及核苷酸磷酸盐的再生溶液；

c.将所述年老细胞与所述再生溶液混合并且培养足以使所述再生溶液的成 分透过细胞的时间；

d.加入细胞培养基、氯化钙和任选抗生素的溶液；

e.在板或者未涂层培养皿的盖上倒置悬滴培养来自步骤d的再生细胞，持续 足以加速细胞聚集的时间；

f.在稀释的琼脂糖凝胶上或者在未涂层的培养皿中，混悬培养所述细胞聚 集物以形成拟胚体；

g.在饲养细胞顶部、涂层板或皿、或者在补充了生长因子的适宜培养基的 基质胶上培养拟胚体细胞；以及

h.选择具有与干细胞相同形态的细胞集落，籍此将所述体细胞去分化为多 潜能细胞，用于细胞疗法和化妆品应用；

其中，所述再生提取物采用包括如下步骤的方法制备：(1).提供新生细胞， ESC，组织干细胞，卵或者从小鼠胚胎、小鼠胎儿、小鼠胎儿组织获得的细胞； (2).分离待提取的细胞；(3).对细胞进行至少两个冻融循环；(4).以高速离心细 胞；和，(5).抽取含有再生因子的上清液；

或者所述再生提取物采用包括如下步骤的方法制备：(1).提供新生细胞， ESC，组织干细胞，卵或者从小鼠胚胎、小鼠胎儿、小鼠胎儿组织获得的细胞； (2).分离待提取的细胞，包含小鼠胎儿细胞和/或小鼠ESC；(3).在低渗缓冲液 中裂解细胞；(4).离心以分离除去缓冲液；(5).对剩余的细胞核进行至少两个冻 融循环；(6).离心以获得细胞核的提取物；

所述细胞培养基为KO-DMEM或DMEM；所述足以加速细胞聚集的时间约为两小 时至过夜；所述稀释的琼脂糖凝胶为约0.2％至约2％的琼脂糖。