[发明专利]确定中胚层、内胚层和中内胚层细胞命运的方法无效
| 申请号： | 200680048455.4 | 申请日： | 2006-10-25 |
| 公开（公告）号： | CN101365784A | 公开（公告）日： | 2009-02-11 |
| 发明（设计）人： | 曼吉利·巴克里;劳伦斯·W·斯坦顿 | 申请（专利权）人： | 科学技术研究公司 |
| 主分类号： | C12N5/06 | 分类号： | C12N5/06;C07K14/475;A61K38/17 |
| 代理公司： | 隆天国际知识产权代理有限公司 | 代理人： | 吴小瑛;刘春生 |
| 地址： | 新加坡*** | 国省代码： | 新加坡;SG |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 确定 中胚层 胚层 细胞 命运 方法 | ||
1.从多能干细胞产生中胚层或者内胚层细胞的方法，所述方法包括 激活多能干细胞中的Wnt信号通路。
2.根据权利要求1所述的方法，其中在Wnt信号通路激活的至少一 部分时间内，多能干细胞为基本上二维的构型。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在Wnt信号通路激活的基 本上全部时间内，所述多能干细胞为基本上二维的构型。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其中所述二维构型是单细胞层。
5.根据上述任一权利要求所述的方法，Wnt信号通路激活至少4天， 例如至少10天。
6.根据上述任一权利要求所述的方法，其中所述多能干细胞包括胚 胎干细胞，例如人类胚胎干细胞。
7.根据上述任一权利要求所述的方法，其中所述中胚层或者内胚层 细胞包括中胚层祖细胞或者内胚层祖细胞。
8.根据上述任一权利要求所述的方法，其中所述中胚层或者内胚层 细胞是专能的、双能的或者单能的。
9.根据上述任一权利要求所述的方法，其还包括使所述中胚层或者 内胚层细胞终末分化的步骤。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述步骤包括使中胚层或者 内胚层细胞暴露于生长因子或者激素。
11.根据上述任一权利要求所述的方法，其中所述多能干细胞Wnt 信号通路的激活导致所述多能干细胞向中胚层或者内胚层途径进行分 化。
12.根据上述任一权利要求所述的方法，其中所述多能干细胞Wnt 信号通路的激活导致所述多能干细胞向中胚层或者内胚层细胞分化。
13.根据上述任一权利要求所述的方法，其中所述中胚层细胞表达 选自下组中的中胚层标记：T-brachyury、Runx1和Pitx2。
14.根据上述任一权利要求所述的方法，其中所述内胚层细胞表达 选自下组中的内胚层标记：Gata4、Foxa2、Sox17、AFP和MixL1。
15.根据上述任一权利要求所述的方法，其中所述多能干细胞Wnt 信号通路的激活导致中内胚层细胞的产生。
16.根据上述任一权利要求所述的方法，其中所述中内胚层细胞表 达内胚层标记和中胚层标记。
17.根据上述任一权利要求所述的方法，其中所述方法不导致外胚 层细胞的产生。
18.根据上述任一权利要求所述的方法，其中所述方法包括激活卷 曲蛋白(Fz)受体来激活Wnt信号通路。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述方法包括使所述多能干 细胞暴露于能够结合并且激活卷曲蛋白(Fz)受体的Wnt配体或其变异体。
20.根据权利要求18或19所述的方法，其中所述Wnt配体包括 Wnt3A(Mouse Genome Informatics MGI ID 98956)。
21.根据上述任一权利要求所述的方法，其中所述方法包括减少多 能干细胞中糖原合成酶激酶(EC number2.7.1.37.GSK蛋白激酶(GSK-3)) 的活性来激活Wnt信号通路。
22.根据上述任一权利要求所述的方法，其中所述GSK包括GSK-3β (NCBI GeneID 433548)。
23.根据权利要求21或22所述的方法，其中通过使多能干细胞暴 露于GSK-3β的化学抑制剂来减少所述糖原合成酶激酶的活性。
24.根据上述任一权利要求所述的方法，其中所述化学抑制剂包括 能够减少GSK活性的iGSK-3β或者BIO、或其变异体。
25.根据上述任一权利要求所述的方法，其中所述方法包括增加多 能干细胞中β-连环蛋白的活性来激活Wnt信号通路。
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