[发明专利]免疫佐剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫佐剂。

背景技术

以往，常用的大部分免疫佐剂在生物体中给药的部位起两种作用：(1)抗原保持以不快速扩散的水性或油性乳剂的性状，且抗原缓缓释放，有效地供给免疫载体细胞，(2)引起炎症反应，使集合于炎症部位的免疫载体细胞活化。近年来，清楚了抗原提呈细胞在诱导产生抗体的液性免疫反应和诱导杀伤T细胞的细胞性免疫反应任意一种均起到免疫反应中心的作用，并且作为抗原提呈细胞，有树突状细胞、巨噬细胞和B细胞。其中，树突状细胞具有最强的抗原提呈能力(DendriticCells，second edition，ed.Lotze，M.T.and Thomson，A.W.，Academic Press，SanDiego，2001)。将可有效活化抗原提呈细胞的物质与抗原一起施加给生物体，该物质作为免疫佐剂作用，在液性免疫反应和细胞性免疫反应任意一种均可以有效诱导增强针对抗原的免疫反应。

尽管以往已经了解了很多种免疫佐剂，然而在人肿瘤的治疗和以预防转移和复发为目的的肿瘤免疫疗法中可以使用的安全且价格低廉的免疫佐剂却很少。例如，在利用培养树突状细胞的肿瘤免疫疗法中，使用了钥孔嘁血蓝蛋白作为免疫佐剂(Geiger，J.D.，等人，Cancer Res.，61，pp.8513-8519，2001)，但该物质价格很高。现在也提出了施以直接活化树突状细胞的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor：以下简称为“GM-CSF”的情况)等细胞因子类作为免疫佐剂的方法，但是细胞因子类的价格更高。

在用于针对传染病的对抗措施的疫苗的制备中，作为安全且价格低廉的免疫佐剂，一直使用的是像氢氧化铝(Alum)、弗氏不完全佐剂(Freund’s imcompleteadjuvant，这种佐剂由于是油性，因此一直担心毒性问题)，或Montanide等这样的活性不充分的免疫佐剂。这些佐剂如果与动物实验中使用的弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant：以下将其简称为“FCA”的情况)和Ribi佐剂系统(Ribi Adjuvant System)相比，毒性低的免疫佐剂活性也低。

通过硫酸铵沉淀法纯化结核菌感染例检测用结核菌素，尤其是结核菌素中的蛋白成分获得的纯化结核菌素(以下存在简称为“PPD”的情况)，由于即使对人重复给药也极为安全，而且便宜，因此在全世界普及。本发明人发现可以使用PPD作为免疫佐剂使用(PCT/JP00/00692)。而且，本发明人还通过将PPD制成经可溶性蛋白与粘多糖的凝聚获得的沉淀物，在经物理手段使之变性的肿瘤组织内给药，发现制成用于诱导抗肿瘤免疫反应的有效免疫佐剂(日本专利第3492671号)。该免疫佐剂具有比溶解状态的PPD更高的免疫佐剂活性，与溶解状态的PPD同样具有极高的安全性。可是，若与FCA和内毒素的主要成分-脂多糖(以下存在将其简称为“LPS”的情况)相比，其免疫佐剂活性并不充分。

可以吞噬微粒状的抗原的未成熟的抗原提呈细胞在末梢血中流动。已知的是，如果在体外培养中的未成熟的抗原提呈细胞中添加LPS，则成熟增进，显示出强力的抗原提呈能力。该过程中活化的抗原提呈细胞释放出GM-CSF、白细胞介素(以下，存在简称为“IL”的情况)-12、干扰素γ(以下存在将其简称为“IFNg”的情况)等各种细胞因子。GM-CSF自身为树突状细胞的生存所必需的细胞生长因子，因此一旦活化的树突状细胞由于GM-CSF的自分泌机制，因此长期保持活化状态而可继续存活下去。树突状细胞以及巨噬细胞是由相同的造血干细胞分化的同一系统的抗原提呈细胞，一旦受到免疫刺激，则与树突状细胞一样产生GM-CSF等细胞因子。

实际上，通过以固体化微粒化的肿瘤组织作为抗原，与GM-CSF等细胞因子一起在体内给药，可以有效诱导针对肿瘤细胞的抗肿瘤免疫反应(PCT/JP00/00692)。该事实表明，在GM-CSF自身形成免疫佐剂的同时，受到免疫佐剂的刺激的抗原提呈细胞所产生的GM-CSF的量可以作为表示原免疫佐剂的活性的指标。也就是说，通过定量人来源的抗原提呈细胞产生的GM-CSF，可以在不使用人个体的体外实验系统中推定在人体中的免疫佐剂活性。