[发明专利]硫酸乙酰肝素粘多糖裂解酶及其用途

权利要求书

1.特异性切割肝素或硫酸乙酰肝素的方法，其包括：

选择一种分离的多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)GAG裂解酶I 多肽，其中所述分离的多形拟杆菌GAG裂解酶I多肽切割肝素或硫酸乙酰肝 素的与硫酸化的糖醛酸有关的一种或多种糖苷键和与硫酸化的氨基己糖有关 的一种或多种糖苷键，其中所述多形拟杆菌GAG裂解酶I多肽为SEQ ID NO: 2、4或23的氨基酸序列；

将肝素或硫酸乙酰肝素与所述分离的多形拟杆菌GAG裂解酶I多肽相接 触，从而在与硫酸化的糖醛酸有关的一种或多种糖苷键和与硫酸化的氨基己 糖有关的一种或多种糖苷键处特异性地切割肝素或硫酸乙酰肝素。

2.权利要求1所述的方法，进一步包括使所述肝素或硫酸乙酰肝素与多 形拟杆菌GAG裂解酶II多肽接触，并且其中所述多形拟杆菌GAG裂解酶 II多肽为SEQ ID NO:6、8或10的氨基酸序列。

3.权利要求1所述的方法，其中所述肝素或硫酸乙酰肝素进一步与多形 拟杆菌GAG裂解酶III多肽接触，其中所述多形拟杆菌GAG裂解酶III多肽 为SEQ ID NO:29或34的氨基酸序列。

4.权利要求1所述的方法，其中所述肝素或硫酸乙酰肝素进一步与多形 拟杆菌GAG裂解酶IV多肽接触，其中所述多形拟杆菌GAG裂解酶IV多肽 为SEQ ID NO:37或39的氨基酸序列。

5.权利要求1所述的方法，其中将肝素或硫酸乙酰肝素与以下两种或更 多种相接触：

（1）分离的多形拟杆菌GAG裂解酶II多肽，其中所述多形拟杆菌GAG 裂解酶II多肽为SEQ ID NO:6、8或10的氨基酸序列；

（2）分离的多形拟杆菌GAG裂解酶III多肽，其中所述多形拟杆菌GAG 裂解酶III多肽为SEQ ID NO:29或34的氨基酸序列；和

（3）分离的多形拟杆菌GAG裂解酶IV多肽，其中所述多形拟杆菌GAG 裂解酶IV多肽为SEQ ID NO:37或39的氨基酸序列。

6.权利要求1所述的方法，其中所述多形拟杆菌GAG裂解酶I多肽由 选自如下组成的组中的核苷酸序列编码：编码SEQ ID NO:2、4或23的氨基 酸序列的多肽的核酸分子。

7.权利要求2所述的方法，其中所述多形拟杆菌GAG裂解酶II多肽由 选自如下组成的组中的核苷酸序列编码：编码SEQ ID NO:6、8或10的氨基 酸序列的多肽的核酸分子。

8.权利要求3所述的方法，其中所述多形拟杆菌GAG裂解酶III多肽由 选自如下组成的组中的核苷酸序列编码：编码SEQ ID NO:29或34的氨基酸 序列的多肽的核酸分子。

9.权利要求4所述的方法，其中所述多形拟杆菌GAG裂解酶IV多肽由 选自如下组成的组中的核苷酸序列编码：编码SEQ ID NO:37或39的氨基酸 序列的多肽的核酸分子。

10.前述任一项权利要求所述的方法，其中肝素或硫酸乙酰肝素被切割 成二、三、四、五、六、八和/或十糖。

11.权利要求1-9中任一项所述的方法，其还包括确定所述被切割的肝 素或硫酸乙酰肝素的序列。

12.权利要求1所述的方法，其还包括将肝素或硫酸乙酰肝素与除多形 拟杆菌GAG裂解酶多肽外的一种或多种HLGAG降解酶接触。

13.权利要求12所述的方法，其中所述HLGAG降解酶选自：肝素黄杆 菌(Flavobacterium heparinum)肝素酶I、肝素黄杆菌肝素酶II、肝素黄杆菌肝 素酶III、肝素黄杆菌肝素酶IV、乙酰肝素酶、硫酸酯酶和Δ4,5-葡糖醛酸糖 苷酶。

14.权利要求1或2所述的方法，其中所述多形拟杆菌GAG裂解酶I多 肽切割肝素的2-O硫酸化糖醛酸的一个或多个糖苷键。