[发明专利]细胞培养方法以及使用该方法的自动培养装置

说明书

技术领域

本发明涉及细胞培养方法以及实行该方法的细胞培养装置，特别是涉及不使杂菌等混入(污染)人体的培养细胞而可以得到大量的培养细胞的细胞培养方法以及自动细胞培养装置。 

背景技术

近年来，大量报道了有关使人体已损伤的组织或功能已降低的脏器等再生的再生医疗的研究。在再生医疗中，需要大量构成人体组织或脏器的细胞，再生医疗所需要的细胞可以使用人工培养的培养细胞。 

作为以往的与细胞培养有关的装置，有如同专利文献1所公开的那样可以对培养室内的温度、气体浓度等气氛进行控制的培养装置、和如同专利文献2所公开的除了控制培养室内的气氛之外还可以控制培养组织向培养容器的投入、培养药剂的给排、进而可以控制培养室内的气氛的自动培养装置。 

专利文献1：日本专利第3021789号公报 

专利文献2：国际公开WO2005/059091号公报 

在上述以往的培养装置的前者，培养器内培养基的更换、为了得到大量的培养细胞而调节细胞密度的传代培养等作业都是通过研究者等的手工作业进行的。在是该装置的情况下，例如对于培养基更换或传代等作业，在作业者打开装置的门之后，在注意不要使菌混入到培养器内的同时，拿起培养皿等培养器的盖，使用已灭菌的吸移管，非常注意地进行。另外，在重复传代培养的情况下，需要多次进行将增殖的培养细胞移植至多个培养器中的作业，所以即便是熟练者，也有可能引起污染。 

另一方面，就上述以往的培养装置中的后者即自动培养装置而言，如前所述，也可以控制细胞的投入、培养药剂的给排，进而还可以控制培养室内的气氛。但是，采用的方式是取出在培养装置内培养的细胞并在已注入到容器内的状态下自动运送至装置外，认为在取出培养细胞时的污染方面还存在应该解决的问题。

另外，在想要将人体的组织或脏器再生的情况下，需要大量的培养细胞，但为了得到大量的培养细胞，需要将培养器大型化，需要增加从人体取出的细胞的量。但是，如果将培养器大型化，则产生培养装置当然也大型化、设置空间增大的问题。另外，如果增加从人体取出的细胞的量，产生对人体造成很大损伤的问题。 

其中，作为与使草履虫之类的实验用细胞大量增殖的传代培养技术有关的文献，有专利文献3。关于在该专利文献3中记载的技术，对于在填充有培养基的培养容器内培养的培养细胞，提供新的培养基，对以前的培养基和培养细胞的一部分进行冲洗，稀释培养器内的培养细胞。但是，本技术是培养基冲洗后的细胞直接被供于测量，不适合大量获得供于人体再生医疗的纯细胞。 

专利文献3：日本特开2004-208663号公报 

发明内容

本发明的目的在于，对应上述问题，提供能够获得大量在人体的再生医疗中使用的培养细胞的细胞培养方法以及自动细胞培养装置。 

为了解决上述课题，本发明的培养方法包括： 

（1）将从人体取得的细胞和培养基注入到培养容器内的步骤；（2）进行放入有培养基和上述细胞的上述培养容器内的换气和培养基的更换，并同时进行细胞培养的步骤；（3）在对于上述培养容器内培养的培养细胞进行了清洗之后，将上述已清洗的细胞残留其一部分后将其从上述培养容器内回收到细胞回收容器的步骤；（4）对于在上述步骤（3）中残留在上述培养容器内的培养细胞，注入培养基的步骤；和（5）反复实行上述步骤（2）～步骤（4）的步骤。 

另外，为了解决上述问题，本发明的自动培养装置具有：试剂供给单元，其分开收纳培养所必需的多种试剂；培养单元，其收纳细胞培养容器； 回收单元，其回收在上述培养容器内培养的培养细胞；给排单元，其进行向上述培养容器的细胞供给、试剂从上述试剂供给单元向上述培养容器的供给、和培养细胞从上述培养容器向上述回收单元的排出；控制单元，其对向上述培养容器的试剂供给动作、上述培养容器内的细胞培养动作、和培养细胞从上述培养容器的排出动作进行控制，所述控制单元具有对回收培养细胞时残留在上述培养容器内的培养细胞进行基于上述给排单元的包括试剂供给工序的细胞培养工序、和培养细胞的排出工序至少一次的机构。 

通过本发明，可以得到大量在人体的再生医疗中使用的培养细胞。 

附图说明

图1是表示本发明的自动培养装置的单元构成的方框图。 

图2是表示本发明的第一实施方式的自动培养装置的大致构成的方框图。 

图3是本发明的第一实施方式的培养容器的立体图。