[发明专利]血管老化预测因子及其使用

说明书

技术领域

本发明涉及血管老化预测因子及其使用。具体地，本发明涉及使用人载脂蛋白B100的特定巯基的谷胱甘肽化作为指标的血管老化预测因子及其检测方法。

背景技术

在预期将来将越来越流行的代谢综合征中，代谢综合征的基础疾病糖尿病(葡萄糖耐量低减)、高血压、高脂血症、肥胖症等通常起着血管老化的促进因子作用。血管老化通过形成动脉硬化、动脉阻塞等引起心肌梗塞和脑梗塞。然而，可利用的血管老化的客观指标是那些通过形态学的测量(例如颈动脉的超声波诊断)而获取的客观指标，并且还没有建立起利用患者血清作为样品的简单测量方法。即，至今尚未建立起预测脑阻塞、心肌梗塞、阻塞性动脉硬化等发病的因子，所述脑阻塞、心肌梗塞、阻塞性动脉硬化等是代谢综合征继发的严重且不可逆的组织损伤。

氧化应激被认为是包括生活方式相关疾病在内的许多病症以及衰老的原因之一。还已知氧化应激起到血管老化的促进因子作用。作为氧化应激的标记，蛋白质羰基化的免疫测定法以及用于测定脂质过氧化的TBAS方法通常为大家所熟知。然而，当使用血清作为样品时，这些方法存在特异性和重复性的问题。同时，近年来，已经开发出使用特异性抗体抗LDL中的脂质和蛋白质片段的氧化变性的方法。所述氧化变性表示其中蛋白质和脂质经历不可逆的变性和降解的过程，已知其与动脉粥样硬化的发展有关。然而，某种程度上可以不认为氧化变性是血管老化的较早症候的指标。

通过氧化应激以非酶的方式对蛋白质的巯基进行氧化修饰，其形成分子内交联的蛋白质并引起酶蛋白的失活，由此进行蛋白质的功能变化。有时氧化巯基，以形成不可逆的修饰。S-谷胱甘肽化(蛋白质-SSG，谷胱甘肽化)在保护蛋白质的功能和结构不受这种不可逆的氧化修饰中起作用。换句话说，过氧化氢修饰蛋白质的半胱氨酸的巯基，并促进与次磺酸(-SOH)、进一步与亚磺酸(-SO₂H)和磺酸(-SO₃H)的不可逆变性过程。用谷胱甘肽修饰巯基是可逆的变化，还受还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)的浓度的调节。这称为“氧化还原”。氧化还原是与活有机体或细胞的功能或活性相关的重要机制，并控制细胞分化增殖以及细胞死亡。换句话说，蛋白质巯基的氧化修饰表明活有机体的氧化还原状态的失衡。氧化还原的衰竭引起组织细胞的凋亡和进一步的重塑，并且被认为与血管老化的机制密切相关。

到目前为止，已经报道了经谷胱甘肽修饰的蛋白质的巯基的测定方法。

1)使用抗谷胱甘肽化牛白蛋白抗体的免疫学方法(非专利文献1)。这种方法具有与特异性和测量灵敏度有关的问题，且不适合于实际应用。

2)使用生物素化的谷胱甘肽S-转移酶的方法(非专利文献2)。这是谷胱甘肽S-转移酶通过酶反应识别谷胱甘肽化巯基的事实的应用，但是这种方法涉及与灵敏度和特异性相关的许多问题。

[非专利文献1]Heille，OP等，Eur.J.Neurosci.，vol.6，第793-804页(1994)

[非专利文献2]Cheng，G等，Archiv.Biochem.Biophys.，vol.435，第42-49页(2005)

发明内容

本发明所要解决的问题

本发明的目的是提供对血管老化的预测有用的生物标志和利用该生物标志作为指标来检查由血管老化引起的损伤的方法。

解决所述问题的手段

为了解决上述问题，本发明的发明人不断地进行深入的研究和检查，尤其关注位于低密度脂蛋白(LDL)中的载脂蛋白B100，预先鉴定出谷胱甘肽化巯基的结构域，然后制备抗该部位的特异性抗体，并且建立了高度灵敏的免疫测定法，从而完成本发明。

即，本发明提供了以下内容：

[1]一种血管老化预测因子，其包含具有谷胱甘肽化巯基的载脂蛋白B100；或者含有该谷胱甘肽化区域，且由至少10个氨基酸残基组成的载脂蛋白B100的一部分；

[2]根据上述[1]的预测因子，其中所述载脂蛋白B100及其一部分至少包含序列号2表示的氨基酸序列，其中所述谷胱甘肽化区域为该氨基酸序列中的半胱氨酸的巯基；

[3]一种检查由血管老化引起的损伤的方法，其包括使用生物样品测定具有谷胱甘肽化巯基的载脂蛋白B100；

[4]根据上述[3]的方法，其中所述生物样品为血液；

[5]根据上述[3]或[4]的方法，其中所述由血管老化引起的损伤伴随着选自以下的病症：糖尿病、脑血管障碍、心血管障碍、阻塞性动脉硬化、痴呆、动脉粥样硬化、高血压、肥胖症等；