[发明专利]重组单价抗体及其制备方法

权利要求书

1.用于产生单价抗体的方法，所述方法包括：

i)提供编码所述单价抗体之轻链的核酸构建体，所述构建体包含编码 选定的抗原特异性抗体之V_L区的核苷酸序列和编码Ig之恒定(C_L)区 的核酸序列，其中该编码选定的抗原特异性抗体之V_L区的核苷酸序 列和该编码Ig之C_L区的核酸序列可操作地连接在一起；

ii)提供编码所述单价抗体之重链的核酸构建体，所述构建体包含编码 选定的抗原特异性抗体之V_H区的核苷酸序列和编码人IgG4之C_H区 的核酸序列，其中编码重链的核酸序列经过修饰，使得相应于重链 铰链区的区域不含有任何如下所述的半胱氨酸残基：在存在多克隆 人IgG的条件下或者当施用于人类时，所述氨基酸残基能够参与同 其它包含与人IgG4恒定(C_H)区相同的氨基酸序列的肽形成二硫键， 其中该编码选定的抗原特异性抗体之V_H区的核酸和该编码IgG4之 C_H区的核酸可操作地连接在一起；

iii)提供用于产生所述单价抗体的细胞表达系统；

iv)通过在(iii)的细胞表达系统的细胞中共表达(i)和(ii)的核酸构建体产 生所述单价抗体。

2.根据权利要求1的方法，其中所产生的单价抗体是人抗体。

3.根据权利要求1-2任一项的方法，其中所产生的单价抗体不与合成抗原 (Tyr，Glu)-Ala-Lys结合。

4.根据权利要求1-3任一项的方法，其中编码重链的核酸序列经过修饰， 从而使相应于铰链区的区域中的至少一个氨基酸残基，包括任何半胱氨酸 残基，被删除和/或被替换为其他氨基酸残基。

5.根据权利要求4的方法，其中编码重链的核酸序列经过修饰，从而使铰 链区的半胱氨酸残基被替换为具有不带电荷极性侧链或非极性侧链的氨基 酸残基。

6.根据权利要求4或5的方法，其中具有不带电荷极性侧链的氨基酸独立 地从下组选择：甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸 和色氨酸，具有非极性侧链的氨基酸独立地从下组选择：丙氨酸、缬氨酸、 亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸和甲硫氨酸。

7.根据权利要求4的方法，其中所述核酸序列编码人IgG4的重链，并且 其中该核酸序列经过修饰从而使重链包含这样的C_H区，其中删除了相应于 SEQ ID No：14所示序列中第106和109位氨基酸的氨基酸。

8.根据权利要求4或7的方法，其中所述核酸序列编码人IgG4的重链， 并且其中该核酸序列经过修饰从而使重链包含这样的C_H区，其中至少删除 了相应于SEQ ID No：14所示序列中第106-109位氨基酸残基的氨基酸残基。

9.根据权利要求4-8任一项的方法，其中所述核酸序列编码人IgG4的重链， 并且其中该核酸序列经过修饰从而使重链包含这样的C_H区，其中至少删除 了相应于SEQ ID No：14所示序列中第99-110位氨基酸残基的氨基酸残基。

10.根据权利要求4-9任一项的方法，其中编码重链的核酸序列经过修饰从 而使整个铰链区被删除。

11.根据权利要求1-10任一项的方法，其中编码所述单价抗体之重链的核 酸构建体包括编码人IgG4之C_H区的核苷酸序列，其中编码铰链区的核酸 序列的剪接供体位点的至少一个核苷酸被替换为另一种核苷酸。

12.根据权利要求11的方法，其中编码所述单价抗体之重链的核酸构建体 包括编码人IgG4之C_H区的核苷酸序列，其中相应于SEQ ID No：13所示序 列之第714和722位核苷酸的核苷酸各自被替换为与SEQ ID No：13中该位 置上存在的核苷酸不同的核苷酸。