[发明专利]基于液相色谱法的分析方法及装置

说明书

技术领域

本发明涉及一种液相色谱法，将分析试料与流动相一齐导入分离柱，并通过检测器检测由该柱分离后洗脱出的试料的成分。 

背景技术

液相色谱法(liquid chromatography)作为分析试料成分的分析技术正得到广泛应用。液相色谱法是利用物质相对于固定相与流动相(mobilephase)的这两相的分布状态的差别进行分离的方法，所述固定相形成在柱填充剂表面上或在毛细管内面上，所述流动相流经填充材料或毛细管柱的间隙，试料中的各成分根据其化学性质以不同的速度流过分离柱。 

在对化学性质相互相差甚远的多种物质一齐进行分析时，分析所需要的时间会变长，但是由于若流动相的组成变化则物质的分布状态变化，通常采用使流动相组成随时间改变并在维持分离状态的同时缩短分析时间的流动相组成梯度洗脱法。 

图4中表示使用了流动相组成梯度洗脱法的液相色谱仪。 

在用于输送流动相1a、1b的流动相送液流路2a、2b上分别设置有送液泵5a、5b。送液泵5a、5b通过控制电动机的转速来调节送液量。流动相送液流路2a、2b在混合器11处进行合流，混合器11将流动相1a、1b混合后输送到分析流路12。在分析流路12中隔着试料注入部7设置有分离柱(separation column)15，并在柱15的下游设置有检测器19。 

自试料注入部7注入的试料通过由混合器11混合后的流动相而被导入分离柱15中，按每个成分进行分离，由检测器19检测分离后的试料成分。 

送液泵5a、5b通过控制装置21控制各自的送液量，并按照用于实现梯度洗脱法的规定的送液程序来改变送液量。 

在这种液相色谱仪中，例如，如图5所示，从流动相A为100％、流  动相B为0％的送液状态开始分析，以渐渐地减小流动相A的浓度、增加流动相B的浓度的方式来改变流动相组成，最终使流动相A为0％、流动相B为100％，从而一边改变柱15中试料的保持力一边进行分析。尤其，这样使用多个送液泵在送液泵的下游侧将多个流动相合流的梯度方式被称为高压梯度方式(例如参照专利文献1)。并且，在图5中，纵轴的A、B坐标分别表示A液100％、B液100％。横轴为时间。 

但是，在流动相组成梯度洗脱法中，由于检测器感应流动相的组成变化会引起基线的变动，所以，根据流动相的条件或检测方法有不能适用于分析的情况。 

另外，仅使用流动相组成梯度洗脱法存在不能充分达到其目的的情况。 

另一方面，由于温度也会使物质的分布状态改变，作为代替流动相组成梯度洗脱法的方法，提出了使柱周边的温度随时间改变的温度梯度洗脱法(例如参照非专利文献1)。在此方法中，通过从外部改变柱温度来改变柱内的流动相温度。 

但是，在此方法中，由于因热介质的热容量、热介质或柱管材质的导热率及温度差而导热性变化，所以难以迅速且准确地使温度改变。而且，也有沿柱剖面方向产生温度梯度而易于引起峰形劣化的问题。因此，此提案的温度梯度洗脱法未得到广泛普及。 

专利文献1：特开2003-98166号公报 

非专利文献1：金泽秀子，“温度响应性色谱法”分析，2004年6月号，第303～308页 

发明内容

本发明的目的是提供一种快速且准确的温度梯度洗脱法。 

本发明着眼于若将不同温度的流动相任意地进行混合则能迅速地实现温度调节，并且将流动相在2条流路中调节成相互不同的恒定温度，以任意的混合比将其混合后使其流入被绝热的柱来实现目的。 

即，本发明的基于液相色谱法的分析方法，将所要分析的试料与流动相一齐导入至分离用柱，并将在该柱中分离并洗脱出的试料成分用检测器 进行检测，该基于液相色谱法的分析方法包括如下步骤，以进行温度梯度洗脱法：使柱处于绝热状态；从2条流动相送液流路供给流动相，在混合后导入至柱中，此时，将一条流动相送液流路的流动相温度设定成比在柱中想要调节的温度范围的上限温度高的恒定温度，并将另一条流动相送液流路的流动相温度设定成比在柱中想要调节的温度范围的下限温度低的恒定温度；和通过调节2条流动相送液流路的流量，使流动相的混合比率随时间变化，从而使柱内的流动相的温度随时间变化。