[发明专利]组合物和用于生产组合物的方法

权利要求书

1.用于获得包含来自液体培养基的分离的CTLA4-Ig分子群体的组 合物的方法，所述培养基包含CTLA4-Ig分子的原始群体，其中(1)所 述原始群体的CTLA4-Ig分子具有一个或多个唾液酸残基，(2)所述唾 液酸残基的数目/CTLA4-Ig分子在所述原始群体内有变化，和(3)所述 原始群体包含CTLA4-Ig二聚体和高分子量聚集物，所述方法包括：

(a)收获来自表达CTLA4-Ig分子的哺乳动物细胞培养物的所述液 体培养基；

(b)使所述CTLA4-Ig分子与细胞组分分离；

(c)使CTLA4-Ig二聚体和CTLA4-Ig高分子量聚集物分离；和

(d)将所述CTLA4-Ig分子分成2个或更多级分，其中与至少一个 另外级分相比较，至少一个级分具有更大的唾液酸与CTLA4-Ig分子的 摩尔比，

其中步骤(b)、(c)和(d)同时或以任何顺序进行，以便获得 所述组合物。

2.权利要求1的方法，其中步骤(a)中的所述收获包括获得所述 液体培养物的可溶性级分。

3.权利要求1的方法，其中步骤(c)和(d)包括柱层析的使用， 以便获得具有不同唾液酸含量的CTLA4-Ig分子的级分。

4.权利要求1的方法，其进一步包括柱层析的使用，以减少所述组 合物中的MCP-1含量。

5.权利要求1的方法，其中所述CTLA4-Ig分子包含具有SEQ ID NO：2、5、6、7、8、9或10的一种或多种多肽。

6.权利要求1的方法，其中所述CTLA4-Ig分子包含具有SEQ ID NO：4、11、12、13、14、15或16的一种或多种多肽。

7.权利要求1的方法，其中(d)中具有更大的唾液酸与CTLA4-Ig 分子的摩尔比的所述级分显示约8-约14的唾液酸与CTLA4-Ig分子的 平均摩尔比。

8.权利要求7的方法，其中所述平均摩尔比为约8-约11、约8- 约10、或约8-约9。

9.一种用于分离包含CTLA4-Ig分子的组合物的方法，所述方法包 括：

(i)获得包含生产CTLA4-Ig分子的哺乳动物细胞的液体培养物的 可溶性级分，和以任何顺序，

(ii)对所述可溶性级分实施阴离子交换层析，以便获得包含 CTLA4-Ig分子的富集且洗脱的组合物；

(iii)对所述可溶性级分实施疏水作用层析，以便获得包含 CTLA4-Ig分子的富集且洗脱的组合物；

(iv)对所述可溶性级分实施亲和层析，以便获得包含CTLA4-Ig 分子的富集且洗脱的组合物；和

(v)对所述可溶性级分实施阴离子交换层析，以便获得包含 CTLA4-Ig分子的富集且洗脱的组合物。

10.一种用于分离包含CTLA4-Ig分子的组合物的方法，所述方法 包括：

(i)获得包含生产CTLA4-Ig分子的哺乳动物细胞的液体培养物的 可溶性级分；

(ii)对所述可溶性级分实施阴离子交换层析，以获得包含 CTLA4-Ig分子的洗脱的组合物；

(iii)对步骤(ii)的蛋白质产物实施疏水作用层析，以便获得包 含CTLA4-Ig分子的富集的组合物；

(iv)对(iii)的蛋白质产物实施亲和层析，以获得包含CTLA4-Ig 分子的进一步富集的组合物；和

(v)对(iv)的蛋白质产物实施阴离子交换层析，以便分离包含 CTLA4-Ig分子的组合物。

11.权利要求9或10的方法，其中在步骤(ii)中获得的包含 CTLA4-Ig分子的所述组合物的特征在于：(a)6.0-10.1的NANA与 CTLA4Ig分子的平均摩尔比，和(b)如通过尺寸排阻层析和分光光度 法检测所测定的，小于或等于25.7面积％的CTLA4-Ig高分子量种类。