[发明专利]含有不同长度回文片段的回文免疫调节性寡核苷酸(IMOTM)的免疫刺激活性

说明书

相关申请

本申请要求2005年12月20日提交的美国临时申请流水号60/752,336的 权益。将上述申请教导的全部内容并入本文作为参考。

发明背景

发明领域

本发明涉及化学修饰的回文寡核苷酸类似物的免疫刺激。

相关领域概述

Kuramoto et al.，Jpn.J.Cancer Res.83：1128-1131(1992)教导了包含带有 CpG二核苷酸的回文结构的磷酸二酯寡核苷酸能够诱导α干扰素和γ干扰素 的合成，并可增强天然杀伤活性(natural killer activity)。Tokunaga et al.，J.Natl. Cancer Inst.72(1984)955-96.Pisetsky et al.；Reich et al.，Mol.Biol.Rep.18 (1993)217-221；Krieg et al.，Yi et al.，Nature 374(1995)546-549和Sato et al.， Science 273(1996)352-354教导在特定的序列背景中含有未甲基化CpG二核 苷酸的细菌DNA、合成寡脱氧核苷酸和DNA疫苗(CpG DNA)能活化脊椎动 物免疫系统。

Toll-样受体(TLR)作为感染的感应器发挥功能，诱导先天性和适应性免疫 应答的活化。TLR识别多种配体，称为病原体相关性分子图式 (pathogen-associated molecular pattern；PAMP)。一旦识别了保守的病原体相关 性分子产物，TLR通过它们的胞内信号传导结构域——Toll/白细胞介素-1受 体(TIR)结构域和下游适配体蛋白MyD88来活化宿主防御应答。树突细胞和 巨噬细胞通常响应于(它们也会产生)Toll-样受体(TLR)配体和细胞因子(例 如，白细胞介素-1β；IL-6和肿瘤坏死因子，TNF)；天然杀伤(NK)细胞和T 细胞还参与促炎回路(pro-inflammatory circuit)。在细菌化合物刺激TLR之后， 天然免疫细胞释放一系列细胞因子和趋化因子。一些TLR配体的实例包括， 但不限于，脂蛋白；肽聚糖、酵母聚糖(TLR2)、双链RNA、聚I：聚C(TLR3)、 脂多糖、热激蛋白、紫杉醇(TLR4)、鞭毛蛋白(TLR5)和咪唑喹啉-R848、瑞喹 莫德、咪喹莫特；ssRNA(TLR7/8)、β-淋巴细胞(TLR10)和profilium样分子和 尿病原性大肠杆菌(uropathogenic E.coli)(TLR11)。

Krieg et al.，Annu.Rev.Immunol.20(2002)709-760；Dalpke et al.，Biol. Chem.383(2002)1491-1500和Kandimalla et al.，Curr.Opin.Mol.Ther.4(2002) 122-129教导CpG DNA诱导天然免疫细胞产生Th1细胞因子，Th1细胞因子 促进细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答，并且促进B细胞产生免疫球蛋白。CpG DNA的免疫刺激特性使得它们不但可以在免疫治疗中用作佐剂，还可以用作 治疗剂，用于广谱的疾病适应征，包括癌症、病毒和细菌感染、炎性病症。

除化学修饰之外，许多结构上的修饰影响CpG DNA的活性。Kandimalla et al.，Nucleic Acids Res.30(2002)4460-4469教导，通过3’-3’-联结的、含有 两个游离的易接近5’端的CpG DNA与含有多个拷贝CpG基序和单一5’端的 常规CpG DNA相比具有较高的活性。

Kandimalla et al，Biochem.Biophys.Res.Commun.306(2003)948-953教 导，CpG DNA中二级结构的存在显著影响它们的活性，这依赖于二级结构的 位置和性质，5’-端发夹结构的存在消除了刺激活性，而位于3’-端的相同结构 对免疫活性影响不显著，但是导致IL-6分泌的降低，并且有助于提高核酸酶 的稳定性。