[发明专利]EPHA2 BiTE分子及其应用

权利要求书

1、双特异性单链抗体，包含

(a)分别来自免疫特异性结合CD3的抗体的第一重链可变结构域(VH 结构域)和第一轻链可变结构域(VL结构域)，所述第一VH结构域通过足够 长度的第一接头与所述第一VL结构域共价连接，从而所述第一VH结构域 和所述第一VL结构域折叠形成结合CD3的第一结合结构域；以及

(b)来自免疫特异性结合暴露于细胞表面的EphA2表位的抗体的第二 VH结构域和第二VL结构域，所述第二VH结构域通过足够长度的第二接头 与所述第二VL结构域共价连接，从而所述第二VH结构域和所述第二VL结 构域折叠形成结合所述EphA2表位的第二结合结构域；

其中所述第一结合结构域与所述第二结合结构域通过足够长度的第三 接头共价连接，从而所述第一结合结构域和所述第二结合结构域彼此独立 地折叠。

2、权利要求1所述的双特异性单链抗体，其中免疫特异性结合CD3的 第一结合结构域结合CD3的ε亚基。

3、权利要求2所述的双特异性单链抗体，其中特异于CD3的ε亚基的第 一结合结构域相对于第二结合结构域而言位于N-末端。

4、权利要求2所述的双特异性单链抗体，其中特异于CD3的ε亚基的第 一结合结构域相对于第二结合结构域而言位于C-末端。

5、权利要求2所述的双特异性单链抗体，其中第一结合结构域和第二 结合结构域以VH_CD3-VL_CD3-VH_EphA2-VL_EphA2的顺序排列。

6、权利要求2所述的双特异性单链抗体，其中免疫特异性结合CD3的ε 亚基的第一结合结构域是去免疫化的。

7、权利要求2所述的双特异性抗体，其中第二结合结构域的VH和/或 VL结构域是EA2、EA3、EA4、EA5、3F2、4H5、2A4、2E7、12E2、 Eph099B-102.147、Eph099B-208.261、Eph099B-210.248、Eph099B-233.152、 Eph101.530.241、233或G5的VH和/或VL结构域。

8、权利要求2所述的双特异性单链抗体，其中第一、第二和第三接头 序列的长度包含至少5个残基、至少10个残基、至少15个残基、至少20个残 基、至少25个残基或至少30个残基。

9、权利要求2所述的双特异性单链抗体，其中位于所述结合CD3的ε 亚基的第一结合结构域的第一重链可变结构域与第一轻链可变结构域之间 的所述第一接头包含序列SEQ ID NO：57。

10、权利要求2所述的双特异性单链抗体，其中位于所述结合EphA2 的第二结合结构域的第二重链可变结构域与第二轻链可变结构域之间的所 述第二接头包含序列SEQ ID NO：59。

11、权利要求2所述的双特异性单链抗体，其中位于所述第一结合结构 域与第二结合结构域之间的第三接头包含序列SEQ ID NO：58。

12、权利要求2所述的双特异性单链抗体，其中第一结合结构域的VH 和/或VL结构域来自人源化的抗CD3抗体。

13、权利要求2所述的双特异性单链抗体，其中第二结合结构域的VH 和/或VL结构域来自人源化的抗EphA2抗体。

14、权利要求2所述的双特异性单链抗体，其中与所述第二结合结构域 与EphA2的结合相比，所述第一结合结构域以更低的亲和力与CD3的ε亚基 结合。

15、权利要求14所述的双特异性单链抗体，其中结合CD3的ε亚基的第 一结合结构域的解离常数是4×10^-7M。

16、权利要求14所述的双特异性单链抗体，其中结合EphA2的第二结 合结构域的解离常数是1.13×10^-7M。