[发明专利]用于影响人或动物组织的疾病的“体外”诊断方法

说明书

本发明涉及用于影响人或动物组织的疾病的“体外”诊断方法， 特别涉及牵涉人或动物的炎症和纤维化、更特别是肝脏疾病的疾病诊 断方法。

本发明涉及通过检查组织的包含胶原的活检样品来诊断人或动物 的异常形态学状况，其中胶原斑点以及炎症块(inflammation mass)通过 本发明的方法定量表示。术语“异常状况”是指病理学状况或引起前 病理学情况或后病理学情况的状况并且可以识别其异常形态测量学。 这种异常状况可能是例如肿瘤疾病，水肿，血肿，急性或慢性炎性病 变和胶原病。

在本发明的具体实施方案中，受影响的组织是肝脏组织。

慢性丙型肝炎的抗病毒治疗是昂贵的，仅在50％的病例中有效， 并且有时具有较大的不希望的副作用。因此，选择待治疗患者的标准 成为中心问题，通过评价在活检样品中观测到的组织学上的炎性病变 (分级)和纤维化(分期)来寻找其解决方案。

已知许多肝脏疾病目前使用一般较复杂的定性方法进行活组织检 查评价。单个活检样品对于制定慢性肝炎的诊断、排除其它疾病、推 测预后和确立治疗方案仍然是获得最大信息量的最有效手段。然而， 取得活检样品是昂贵的，其具有风险并且在其结果不代表真实测量值 的情况下其结果是不可靠的，仅仅是严重程度的半定量分析类型，这 种分析类型的评价完全依靠病理学家的主观熟练程度。

最近推荐的可供选择的方法通过测量与肝脏炎症进展有关的分子 的血液水平来评价肝组织炎症，包括被使用的转氨酶水平的测量法， 但是该方法未显示与该疾病发展有任何意义明确的关联。

因此，在评价慢性肝脏演变过程中仍然存在不确定性。纤维化的 评价已被证明是关键要素，即，在慢性肝炎的组织学型式中通常可观 测到的病变。胶原(其形状为高度不规则的疤痕，在门脉间隙内散布) 的值得注意的存在，是由于坏死性炎症核引起门脉炎症所致。新形成 的胶原生长成细纤维或不同厚度的纤维集束(sets)，其使得肝实质虚空 (dry out)。在疾病的更晚期，纤维集束形成门脉-门脉和中央(central)- 门脉连接。

上面所指的在评价肝病分期中的不确定性的主要源头是用于评价 存在于肝组织内的纤维化的方法。被最广泛使用的半定量法，指出疾 病严重性的类型，但不提供测量量度。

另外，靠近较大的胶原碎片，通过计算机辅助的光学显微镜识别 被特异性染色的结缔组织(天狼星红(Sirius Red)或其它特定的染色剂)， 能够发觉过多的极小且高度凹陷的碎片(fragments)，其通过常规观测无 法被看到。对这种小碎片的评价(该评价迄今为止还未通过诊断方法 进行)具有关键的重要性，因为这种碎片的存在是病理学动态演化的 指标。

事实上，胶原结构的最初三维形态是分散开的一组胶原小岛，其 随着疾病的进展，由于生长的胶原纤维的末端被慢性炎性过程促进而 发生拼接，演变成海绵体(纤维化)。在肝脏的二维组织切片中，该海绵 体表现为在组织内不规则分布的非常褶皱的胶原面积。

通常，活检样品的标准化仍然是一个未解决的问题。高的形态学 复杂性是肝组织的肝性炎症、纤维化和构造的特征。

类似地，在其它疾病中可以发现复杂的特征，所述其它疾病包括 慢性炎性过程，例如胰腺炎，胃炎和前列腺炎。

定性描述慢性炎性过程的组织学分析的三个特征参数是：i)被炎性 细胞簇所覆盖的面积和被孤立的炎性细胞所覆盖的面积，即，所谓的 “炎性组织”；ii)被具有不同大小的胶原小岛所覆盖的面积；和iii)组 织构造，在受损组织内典型的病症由纤维化组织与导致小叶结构破坏 的实质组织之间的正确比例丧失所致。这对于肝组织尤其如此。

形态定量方法(morphometrical methods)已被证明不适于测量纤维 化的不规则的形状，因为欧几里德几何学不能适用于这种形状。相反 地，欧几里德几何学适合测量点、规则的线条、平面和具有体积的物 体，它们的尺寸可以分别用整数0、1、2和3表示并且其形状在光学 放大期间不发生改变。