[发明专利]用于生成莫纳甜异构体及其前体的多肽和生物合成途径

权利要求书

1.一种方法，其包括通过一途径生成莫纳甜或其盐，所述途径包括：由 L-色氨酸生成吲哚-3-丙酮酸，由所述吲哚-3-丙酮酸生成至少包括R-莫纳甜 前体(＂R-MP＂)的莫纳甜前体(＂MP＂)，以及由所述莫纳甜前体生成莫纳甜，其 中所述莫纳甜至少包括R，R莫纳甜，且其中由L-色氨酸生成吲哚-3-丙酮酸 是经对L-色氨酸比对莫纳甜前体、莫纳甜、或两者具有更高活性、更高特异 性、或两者的一种或多种酶促进的。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述的一种或多种酶选自L-色氨酸氨 基转移酶、L-芳族氨基转移酶、L-天冬氨酸氨基转移酶、L-氨基酸氧化酶、 和它们的组合。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述的一种或多种酶选自苜蓿中华根 瘤菌(Sinorhizobium meliloti)TatA、HEXAspCP9T/R122G、和它们的组合。

4.如权利要求2所述的方法，其中所述的一种或多种酶对莫纳甜前体、 莫纳甜、或两者具有限制活性、限制特异性、或两者。

5.如权利要求4所述的方法，其中由所述R-莫纳甜前体生成所述R，R 莫纳甜是由一种或多种选自D-氨基转移酶和D-氨基酸脱氢酶的酶促进的。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述D-氨基转移酶选自耐盐芽孢杆 菌(Bacillus halodurans)D-氨基转移酶，杂合D-氨基转移酶，嗜热脂肪土芽 孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)D-氨基转移酶，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)D-氨基转移酶，ATCC4978D-氨基转移酶，ATCC7063D-氨基 转移酶，具有D-氨基转移酶活性的地衣芽孢杆菌支链氨基转移酶，和它们 的同源物。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述耐盐芽孢杆菌D-氨基转移酶含 有登录号NP-243677所列的氨基酸序列，或其同源物。

8.如权利要求6所述的方法，其中所述具有D-氨基转移酶活性的地衣 芽孢杆菌支链氨基转移酶选自含有相应于大肠杆菌(E.coli)F37Y的突变的地 衣芽孢杆菌支链氨基转移酶，含有相应于大肠杆菌Y96F的突变的地衣芽孢 杆菌支链氨基转移酶，含有相应于大肠杆菌Y165L的突变的地衣芽孢杆菌 支链氨基转移酶，含有相应于大肠杆菌L127K的突变的地衣芽孢杆菌支链 氨基转移酶，含有相应于大肠杆菌R98Y的突变的地衣芽孢杆菌支链氨基转 移酶，含有相应于大肠杆菌L108R的突变的地衣芽孢杆菌支链氨基转移酶， 含有相应于大肠杆菌L110H的突变的地衣芽孢杆菌支链氨基转移酶，含有 相应于大肠杆菌L127Y的突变的地衣芽孢杆菌支链氨基转移酶，含有相应 于大肠杆菌R41K的突变的地衣芽孢杆菌支链氨基转移酶，和其同源物。

9.如权利要求6所述的方法，其中所述杂合D-氨基转移酶是SEQ ID NO：99，或其同源物。

10.如权利要求6所述的方法，其中所述ATCC4978D-氨基转移酶是 SEQ ID NO：86，或其同源物。

11.如权利要求6所述的方法，其中所述ATCC7063D-氨基转移酶是 SEQ ID NO：87，或其同源物。

12.如权利要求5所述的方法，其中所述D-氨基转移酶是在存在5’磷 酸吡哆醛的情况下纯化的。

13.如权利要求5所述的方法，其中所述D-氨基酸脱氢酶选自D- AADH-101、D-AADH-102、D-AADH-103、D-AADH-105、D-AADH-106、 D-AADH-107、D-AADH-108、和它们的同源物。

14.如权利要求4所述的方法，其中所述生成的R，R莫纳甜是生成的 总莫纳甜重量的至少约60％。

15.如权利要求1所述的方法，其中由吲哚-3-丙酮酸生成所述莫纳甜 前体是经具有R-特异性醛缩酶活性的一种或多种酶促进的。