[发明专利]一种血清总铁结合力的自动分析法及液体稳定试剂

说明书

技术领域

本发明涉及血清总铁结合力的自动分析法及其液体稳定试剂，可广泛应用在医学及生物化学技术领域。

背景技术

血清总铁结合力(TIBC)的测定是常规检验项目。众多临床资料表明，缺铁性贫血、急性肝炎等疾病可导致血清总铁结合力降低，而肝硬变、肾病、尿毒症和血色沉着症等疾病可导致血清总铁结合力增高。测定血清TIBC的含量，对相关疾病的确诊、治疗效果的观察具有重要的临床价值。

目前，临床测定血清TIBC主要采用经轻质碳酸镁吸附的原子吸收法和各种络合光度法。原子吸收法为测定TIBC的推荐方法，但该法不仅需专用昂贵仪器，而且需沉淀、离心，检测成本高，操作步骤繁，临床实际难以普及；用络合光度法测定TIBC操作虽相对简便，但该法同样需沉淀、离心，无法应用于生化自动分析仪。

本发明的目的是为了解决上述技术的不足，通过转铁蛋白在碱性条件下可吸附铁离子、在酸性条件下可释放铁离子性质的运用，向临床提供一种无需沉淀、离心、可直接应用于全自动生化分析仪、且对自动生化分析的管道无污染的自动化测定技术及其相应的液体稳定试剂。  该测定试剂置2-8℃保存可至少可稳定6个月，提供的方法和试剂可以应用于目前广泛使用的临床生化自动分析仪，从而达到大规模测定样本的要求。

发明内容

本发明提供了一种总铁结合力的自动分析法及液体稳定试剂，用于血清总铁结合力的测定。该测定体系主要是通过在碱性溶液中，转铁蛋白被游离铁离子饱和，当测定体系的pH值转变至酸性时，与转铁蛋白结合的铁离子从转铁蛋白中释放出来并与铬天青B发生灵敏的显色反应，此时测定体系的吸光度上升，其吸光度的上升值与样本中总铁结合力含量成正比，在自动生化分析仪上以两点终点法的测量模式实现对样本中总铁结合力含量的测定。

为了达到理想的检测效果与足够的稳定性，本发明提供的两点终点法转铁结合力自动化检测试剂，特别可以分为A、B二个组份。两个组份的具体成份组成可表述如下。

A组份：

pH8.4缓冲液    50-150mmol/L

铬天青B        120-180μmol/L

碳酸氢钠       50-300mmol/L

表面活性剂     5-30ml/L

去干扰剂       5-15mmol/L

还原剂         0.5-5g/L

防腐剂         0.1-2g/L

B组份：

pH3.5缓冲液    50-200mmol/L

表面活性剂     5-30ml/L

铁解离剂       10-50g/L

为了提高上述测定试剂的准确性和稳定性，消除测定结果受外界的多种干扰，所述的两点终点法测定试剂中缓冲液可以为GOOD’S系列缓冲液、甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液、邻苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲液、HAc-NaAc缓冲液；表面活性剂可以为SDS、Tween20、Tween80、Brij35、Brij98、乳化剂OP、TritonX-100等非离子型表面活性剂其中的一种；去干扰剂可以是硫脲、氨基硫脲；还原剂可以是盐酸羟胺、抗坏血酸；防腐剂可以是NaN₃、PC系列防腐剂；铁解离剂可以是尿素、盐酸胍、异氰盐酸胍。

具体实施方式

实施例：血清转铁蛋白两点终点法测定试剂，A组份中缓冲液特别优选Tris-HCl缓冲液，B组份中缓冲液特别优选醋酸-醋酸钠缓冲液；A组份中特别优选的表面活性剂是TritonX-100，B组份中特别优选的表面活性剂是Tween80；去干扰剂优选为硫脲；还原剂优选为盐酸羟胺；防腐剂优选为NaN₃；铁解离剂优选为盐酸胍。在上述试剂组成中，Tween80、TritonX-100可使测定体系在测量过程中保持清亮，避免由于蛋白质的浑浊而引起测量体系吸光度的异常升高，硫脲用于消除血清铜的干扰，盐酸羟胺用于将Fe³⁺还原为Fe²⁺，NaN₃用于抑制微生物的生长，盐酸胍用于将铁离子从血清转铁蛋白中裂解开来。

A组份：

pH8.4 Tris-HCl缓冲液        80mmol/L

铬天青B                     160μmol/L

碳酸氢钠                    120mmol/L

TritonX-100                 10ml/L