[发明专利]一种调控苹果实生树阶段转变的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种调控苹果实生树阶段转变的方法，具体涉及一种利用生理标记辅助调控苹果实生树阶段转变的方法。

背景技术

果树实生树从播种到结果需要几年甚至十几年时间，这是提高果树育种工作效率的技术瓶颈。果树等木本被子植物的个体发育过程分为童期、成年营养生长期和生殖生长期。实生树表现童性，不具备成花能力的发育阶段称为童期；实生树虽然具备了成花潜能，但在自然条件下不能成花，接受某种诱导后可以成花，而且之后即使不再实施这种诱导也能连续成花的发育阶段称为成年营养生长期；而实生树在自然条件下连续开花结果的阶段称为生殖生长期。

为提高果树育种效率，将实生树从播种到自然条件下连续开花结果所需的时间缩到最短，一直是果树育种工作者追求的目标。苹果、桃等多年生木本果树的育种理论上，要缩短实生树开花结果所需的时间，前期需要采取促进营养生长的技术措施，使其快速通过童期，而实生树进入成年营养生长期之后则应采取抑制营养生长的技术措施，以降低成花节位，提早开花结果，从而缩短育种周期。

缩短成年营养生长期是指通过采取有效措施降低实生树成花节位。目前还没有专用的降低果树实生树成花节位的方法，实践中一般采用与促花有关的技术措施，包括低温、生长调节剂、嫁接、扦插、环剥、环割、绞缢、限根、断根等等。这方面的研究报道很多，许多促花的技术可以显著提高果树实生树成花率，但并非所有促花措施都能有效地降低实生树的成花节位。

育种实践中成年营养生长期从何时何处起始，到何时何处结束至今尚不清楚，限制了育种效率的提高。因此，准确确定实生树童性的消失，进入成年营养生长期的临界点，对于提高果树育种效率十分重要，而且，即使找到了某实生树在某特定条件下成年营养生长期的起始的临界节位，其在不同杂交组合、不同自然条件下也不能通用，所以，只有找到合适的生理生化标记辅助，适时对实生树采取适宜的调控措施，才能达到上述目的。

关于苹果及其他木本植物阶段转变的生理标记尚无相关专利，相关论文报道如下：甜樱桃组培苗中有一种28千道尔顿蛋白质可做童性标记，童期高于成年期^[1，2，3]。这种蛋白质在苹果等植物上也有，也是组培苗返童和生根能力的标记。但关于实生树阶段转变的调控技术尚无相关专利报道。

发明内容

本发明提供一种调控苹果实生树阶段转变的方法，该方法缩短实生树开花结果所需的时间，实生树进入成年营养生长期之后抑制营养生长，以降低成花节位，提早开花结果，从而缩短育种周期。

为实现上述目的，本发明是采用以下技术方案来实现的：

一种调控苹果实生树阶段转变的方法，连续测定不同节位采样中所含多酚中的根皮苷、杨梅苷、咖啡酸的含量，对其进行分析，确定实生树阶段转变开始与结束的临界点，对实生树采取调控措施，其具体步骤如下：

1)采样：

①苹果实生幼树于春季从根颈部选留1个萌蘖，8-9月份采样时，剪取此选留萌蘖，再从树干中部剪取1个旺盛生长的基部节位与选留萌蘖的梢端节位重叠5-10节的新梢；从实生树的基部起随节位升高，每5节为1采样单元，取30株实生树，分别取其相同节位采样单元混合，重复1次；

②自来水清洗所述采样单元后分别取叶片、芽、韧皮部，用纱布包好投入液氮中待测；

2)采用高效液相色谱法分别测定采样叶片、芽、韧皮部中的根皮苷、杨梅苷、咖啡酸的含量，利用外标法定性，采用高效液相色谱条件：色谱柱为C18反相柱，柱温30℃，流动相中的水、冰乙酸、甲醇的体积比为52∶5∶43，流速：0.7毫升/分，紫外检测器，检测波长280纳米，所述根皮苷、杨梅苷、咖啡酸标样购自Sigma公司，乙酸、丙酮为国产分析纯，甲醇为国产色谱纯，水为双蒸水。

3)实生树阶段转变的确定

根据上述不同节位采样中根皮苷、杨梅苷、咖啡酸的连续测定结果进行分析，

①从基部向上，如果某节位芽采样中开始检测到了根皮苷，或者韧皮部采样中检测不到咖啡酸，即可判定为实生树在该节位开始阶段转变，进入成年营养生长期，即可实施实生树阶段转变调控：

②如果从某节位开始韧皮部采样中检测不到杨梅苷，或者叶片采样中检测不到咖啡酸，则可以判定为实生树在该节位完成阶段转变，进入生殖生长期。

4)实生树阶段转变的调控：