[发明专利]一种用超微磁颗粒分离纯化生物靶物质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物样品中特定物质的分离纯化，特别是指一种用超微磁颗粒分离纯化生 物靶物质的方法。

背景技术

现有技术中，已经有许多方法用磁颗粒分离纯化纯化生物大分子(核酸、蛋白等)， 这些方法都是用磁颗粒吸附生物大分子，这些磁颗粒包括：硅磁颗粒、玻璃磁颗粒等，从 而达到分离和纯化的目的。在美国专利6027945中描述了一种利用硅磁颗粒进行生物靶物 质分离纯化的方法，该方法的主要特点是利用硅磁颗粒在特定条件下(高浓度胍盐)吸附 核酸等物质，然后外加磁场分离纯化结合有核酸的磁颗粒，经过含乙醇的洗液洗涤，最后 用水将核酸从磁珠上洗脱。另外，在美国专利6562568中利用一种玻璃磁颗粒进行生物靶 分子分离纯化的方法，其操作步骤与专利6027945中描述基本一致，只是使用的磁颗粒不 同，这个专利使用的是玻璃磁颗粒，同样要用高浓度胍盐促进核酸结合到磁颗粒，然后再 用含乙醇的洗液洗涤，最后用水将核酸从磁珠上洗脱，两个专利的主要区别是二者使用的 磁颗粒不同，而同样是三个主要步骤，即“结合”、“洗涤”、“洗脱”。

详观上述方法，不难发现其存在下列问题：

这些方法都是利用直径在0.5-15微米较大的磁颗粒吸附核酸等大分子，然后再磁分 离纯化、洗涤、洗脱核酸。这些方法的特点是粒径较大的磁颗粒吸附核酸，一个磁颗粒吸 附若干个生物分子，而这种磁颗粒吸附核酸的能力较小，所以必须在高浓度强离液盐(如 胍盐)的条件下，同时必须使用氧化硅或玻璃等成分包裹在氧化铁磁颗粒表面而增加吸附 能力，才能结合核酸。另外必须在洗涤磁颗粒和核酸的复合物时使用含有醇的试剂。而高 浓度强离液盐毒性较大，对实验人员和环境有较大影响，而用含有醇的溶液洗涤，对核酸 的后续操作有较大影响。

发明内容

本发明的主要目的在于克服现有技术的缺点，提供一种用超微磁颗粒分离纯化生物靶 物质特别是核酸的方法。

本发明采用如下技术方案：一种用超微磁颗粒分离纯化生物靶物质的方法，包括如下 步骤：

1)将超微磁颗粒加入到含有生物靶物质的样品溶液中，超微磁颗粒结合到生物靶物 质上，其结合方式为一个生物靶物质分子结合若干个超微磁颗粒，形成生物靶物质和超微 磁颗粒的复合物，在外加磁场的作用下，将生物靶物质和超微磁颗粒的复合物从样品中分 离出来；

2)在洗脱液中将超微磁颗粒从生物靶物质上洗脱下来，并在外加磁场的作用下，将 超微磁颗粒分离，从而获得含生物靶物质的溶液。

前述一种用超微磁颗粒分离纯化生物靶物质的方法，所述的生物靶物质和磁颗粒的结 合方式与现有技术不同，现有技术采用粒径较大的磁颗粒，其和生物靶物质结合方式是“一 个磁颗粒吸附多个生物靶物质分子”，而本发明采用粒径较小的磁颗粒，其和生物靶物质 结合方式是“一个生物靶物质分子吸附多个磁颗粒”。这种结合方式的改变，使得本发明 中生物靶物质和磁颗粒的结合更“容易”，从而在后续的结合液的选择、洗涤液的选择、 洗脱液的选择中有更宽松的选择。因此整个生物靶物质分离纯化实验更简单、安全，具有 明显的优越性。

前述一种用超微磁颗粒分离纯化生物靶物质的方法，所述超微磁颗粒的平均粒径为 10-200nm，优选的平均粒径为50-150nm，比现有技术的磁颗粒直径平均小100倍，体积 小100万倍左右。

前述一种用超微磁颗粒分离纯化生物靶物质的方法，所述超微磁颗粒为具有超顺磁性 的超微磁颗粒，可以是含有铁的氧化物的磁颗粒、氧化硅包裹的复合磁颗粒、氧化硅和氧 化硼包裹的复合磁颗粒。

前述一种用超微磁颗粒分离纯化生物靶物质的方法，所述超微磁颗粒为氧化铁磁颗 粒。

前述一种用超微磁颗粒分离纯化生物靶物质的方法，所述生物靶物质为核酸、蛋白质 等生物大分子。

前述一种用超微磁颗粒分离纯化生物靶物质的方法，所述生物靶物质和磁颗粒结合 时，可以使用结合液促进生物靶物质和磁颗粒的结合，结合液由普通的盐溶液、醇溶液或 二者的组合组成，而不采用有毒的高浓度强离液盐(如胍盐)。

前述一种用超微磁颗粒分离纯化生物靶物质的方法，在生物靶物质和磁颗粒结合形成 复合物后，可以用洗涤液洗涤分离出来的这个复合物，并在外加磁场的作用下将洗涤后的 生物靶物质和超微磁颗粒的复合物从洗涤液中分离出来。