[发明专利]一种检测土壤脲酶活性的分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及土壤中脲酶活性的测定，具体地说是一种检测土壤中脲酶活性的分析方法。

背景技术

土壤中的脲酶是名称为尿素胺基水解酶的一类酶的总称，它能催化尿素水解成二氧化碳和氨，并对尿素的水解产物的后续转化及其作用具有重要的影响。

因此，土壤中脲酶活性的强弱影响到土壤尿素氮代谢过程中氮素的气态损失，间接影响氮肥的利用效率。土壤中脲酶的活性受土壤条件如水分、温度、土壤质地的强烈影响，同时也受到农田耕作制度、管理措施以及不同作物的影响。因此，对土壤中脲酶活性的检验有很重要的意义。而到目前为止，有关脲酶活性的测定基本都是参照Φ.X.哈兹耶夫[苏]著，郑洪元、周礼恺、张德生译的《土壤酶活性》一书中的方法。该种方法步骤麻烦，需要专用的分析设备，且培养批次的不同具有差异性和不确定性，使其难以适应土壤中脲酶活性的定性比较和定量研究；同时，该种方法样品的前期处理比较麻烦，降低了实验的效率，增加了实验结果的不准确性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检验土壤中脲酶活性的分析方法。该方法是在借鉴前人测定方法的原理基础上，对脲酶活性的测定步骤和显色方法进行了改进(对测定方法进行改进)，从而减少样品处理和试验步骤的复杂性，使分析结果更加精确可靠，分析重现性更好。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种检测土壤中脲酶活性的分析方法，

1)分别称取n份5-10g过1-2mm筛的土壤风干样品于n支粗试管中，n≥2，每支试管中分别加入2-4mL甲苯处理10-15分钟后，向各试管中加入10-40mL 0.5M磷酸盐缓冲溶液(pH 6.7)；然后向n-1支试管中加入5-10mL重量浓度10-20％的底物尿素溶液，向另1试管中加入等量的蒸馏水作为样本对照；混匀后，塞上不透气的橡皮塞，将试管放在39-41℃的恒温培养箱中培养48h，每24h振荡一次；同时作试剂空白对照，即不加土壤，其余同样品处理；

2)分别向上述试管中加入5-15mL重量浓度0.5％-1％的氯化亚汞溶液以终止反应，并用重量浓度15-18％氯化钾溶液将试管内溶液稀释至20mL；

3)振荡30分钟，用致密滤纸过滤；

4)用扩散法测定生成的氨量；在Conwey皿的内室，注入2mL 0.1NHCI和两滴万用指示剂，吸取4-6mL的滤液(NH₄⁺-N含量不多于100μg)放入皿的外侧，加入5mL K₂CO₃饱和溶液以析出气态氮；立即将皿盖好，仔细摇荡后在室温下放置48h；用0.1N NaOH回滴过剩的酸至绿色，以测的结合的氨；

5)计算生成的氨量；

6)计算脲酶活性：

计算公式为：x＝[(V₁a-V₂b)*1.4*V₃]*100/(W*T*V₄)

式中：x为脲酶活性(mg NH₄⁺-N.100g^-1.48h^-1)；V₁为置于皿中内室的0.1N HCI的毫升数；V₂为用于滴定过剩酸的0.1N NaOH的毫升数；a＝0.99-1.05为0.1N HCI滴定度的修正值；b＝0.99-1.05为0.1NNaOH滴定度的修正值；1.4为当量于1mL 0.1N HCI的NH₄⁺-N的毫克数；V₃为反应混合物的总体积(mL)；V₄用于分析得滤液体积(mL)；W为称取土样重(g)；T为培养的时间(h)；100为换算为100g的系数。

培养后加入的氯化亚汞溶液，可用重量浓度50％的三氯醋酸溶液或者重量浓度0.5％-1％碘化汞(HgI₂)代替。

本发明方法改进的依据：