[发明专利]一种海洋枯草芽孢杆菌及其筛选方法

权利要求书

1.一种海洋枯草芽孢杆菌，其特征在于：其为枯草芽孢杆菌3728C(Bacillus subtilis 3728C)，已经于2007年4月23日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，保藏号为CCTCC No.M 207052。

2.一种海洋枯草芽孢杆菌的筛选方法，其特征在于：

1)菌株初筛：以红树林的木榄幼根根表土壤为分离菌种的样品，将带有根表土壤的木榄幼年根样品剪成0.5-4cm长小段，而后放入盛有海水的三角瓶中，三角瓶置于70-90℃水浴中，热处理10-20分钟，取出冷却，用稀释平皿分离方法涂平皿，进行初筛，初筛平皿放在25-30℃保温箱中保温培养36-60小时，以形态观察挑取单菌落，编号；

所述初筛用的培养基采用牛肉膏蛋白胨麦芽汁琼脂培养基，具体的说就以等重量的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，与等重量的糖度为波美，7度的麦芽汁琼脂培养基，分别装瓶，灭菌冷却，临用时分别加热融化，无菌室内混合均匀倒平皿使用；

2)菌株复筛：将上述初筛得到形态特征为枯草芽孢杆菌典型的菌落，移接到盛有牛肉膏蛋白胨琼脂的斜面试管中，分别挑取单菌落5-10个，放置于25-30℃保温培养36-60小时，供复筛用；

复筛采用平皿拮抗试验方法，以杉木根际土壤病害真菌为靶子菌，按常规方法在平皿上进行对峙的拮抗试验，在25-30℃保温60-84小时，取出平皿，检测初筛菌株对靶子菌的抑菌圈大小，抑菌圈直径达到16mm以上的为合格，择优保存。

3.按照权利要求2所述的筛选方法，其特征在于：所述其木榄幼根为幼年支持根。

4.按照权利要求2所述的筛选方法，其特征在于：已复筛选定的海洋枯草芽孢杆菌进行杉木一年生实生苗盆栽土壤中的定殖试验；

定殖试验：将海洋枯草芽孢杆菌试管斜面菌种，移接扩繁，然后在25-30℃保温培养36-60小时，此时海洋枯草芽孢杆菌菌苔已长得十分丰满，用无菌水刮洗下来，制成菌悬液，使每毫升菌悬液中的菌体细胞数达到10亿个CFU以上，即达到10⁹浓度，与杉木苗盆栽土壤均匀混合，使每克土壤中的试验测定的枯草芽孢杆菌的细胞数达10⁵CFU以上，即每克土壤中达到10万个CFU细胞以上；土壤装入盆内，每盆移栽杉木一年生实生苗，按盆栽试验常规方法管理，接入土中12周后，海洋枯草芽孢杆菌细胞数稳定在10⁵CFU/克·土水平的，说明得到的海洋枯草芽孢杆菌能在杉木根际土壤中定殖，此菌株为有效菌株，供应用试验或推广应用。

5.按照权利要求2所述的筛选方法，其特征在于：所述杉木根际土壤病害真菌为尖孢镰刀菌萎蔫专化型。