[发明专利]一种简易高效的PCR产物纯化回收方法及其专用装置

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种简易高效的PCR产物纯化回收方法及其专用装置。

背景技术

琼脂糖凝胶电泳回收DNA片断的常用方法主要包括以下几种：

柱回收试剂盒：可谓目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中的产物条带切下，用溶解Buffer彻底溶解，上样到包埋有纯化填料的纯化柱，离心，再洗涤一次，离心后用洗脱缓冲液洗脱，得到的产物溶液可以直接用于后继实验。但是这个方法不适合用于大片断的回收。

玻璃奶/纯化填料胶回收试剂盒：这个方法比柱回收试剂盒方法更为灵活，可以根据每次回收实验时预期回收量来调整纯化填料的量，使得实验不受限于柱子的载量，也不会造成浪费。前面的操作步骤和上者一样，将电泳凝胶的条带切下，溶胶缓冲液溶解，加入纯化填料吸附混合，快速加入到一种离心过滤柱上，这种柱子不带纯化填料，只有一层过滤膜，离心过滤后，填料在柱子里，溶液被甩掉，再用洗脱缓冲液洗脱即可。

低熔点琼脂糖：传统手工操作方法之一，低熔点琼脂糖制备凝胶，电泳后切割目的条带，在TE溶液中65℃保温融化，用传统的酚-氯仿抽提，乙醇沉淀。这个方法需要用到酚氯仿等有机试剂，由于乙醇沉淀需时较长，现在用的人已经不多了。

透析袋电洗脱法：切下目的DNA条带放在充满TAE的透析袋中再电泳一段时间，让DNA走出凝胶，走向溶液中，再反向电泳一会儿，将附在透析袋上的DNA赶回溶液中，取溶液部分，再用TAE溶液清洗袋子，合并溶液后采用酚、氯仿抽提。由于透析袋难绑，只有在DNA片段断很大的时才考虑此法，这也是聚丙烯酰胺凝胶回收产物的方法之一。

DEAE纤维素膜纸片法和其他改良法：早期实验室最常用方法之一；将DEAE纤维素膜裁成小条进行活化处理，而后在将电泳后在目的条带前切一窄口，同时将比条带略宽的DEAE纤维素膜插入切口，继续电泳，条带上的DNA被膜片截留，取出膜片冲洗后转移到离心管中加缓冲液65℃保温洗脱，直到膜上没有DNA了，将溶液用酚-氯仿抽提沉淀。这个方法不适合做较大的DNA，因为洗脱比较困难。

以上方法存在操作步骤繁琐、成本高、稳定性差、不适合回收小片段DNA(<200bp)等不同缺点。

发明内容

本发明目的在于提供了一种简易高效的PCR产物纯化回收方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

纯化回收方法：

1)用0.5×TAE缓冲液配制浓度0.5％-1.5％的琼脂糖凝，将30-50ul待纯化的样品在0.5×TAE缓冲液下电泳，50V，30-60分钟；

2)在紫外灯下切下待纯化样品在步骤1)电泳的电泳胶片上的目的条带，而后将琼脂糖胶条在无菌水中清洗1-3遍，除净无菌水待用；

3)将琼脂糖胶条平铺在过滤管中的滤纸片上，然后装入离心管中，以12000-14000转/分钟，离心5-10分钟，离心管收集到的液体即为纯化后的产物。

步骤1)所述的待纯化的样品可为PCR产物或DNA片段。所述步骤2)中待纯化样品电泳的电泳胶片上的目的条带为100-3000bp。

纯化回收方法的专用装置：所述试管4为内部插置过滤管1的离心管3，过滤管1底部铺设滤纸片2。

本发明所具有的优点：

1.简便快捷。切胶、装柱、离心，整个操作过程可在10分钟内完成。

2.成本低。纯化装置取材容易，整个装置及纯化用试剂成本不超过0.5元(RMB)

3.结果稳定可靠。回收率能保持在90％以上。

4.适用范围广泛。纯化的待测样品可为50-3000bp。

附图说明

图1为本发明实验装置分解图。

图2为本发明实验装置图。

图3为PCR产物在0.8％琼脂糖凝胶电泳图谱；其中，A1、A2：179bp，B1、B2：566bp，C1、C2：1485bp，M：DL2000 Marker，凝胶浓度0.8％，上样40ul，电压50V，电泳30min。

图4为PCR产物第一次回收结果0.8％琼脂糖凝胶电泳图谱；其中，A：179bp，B：566bp，C：1485bp，M：DL2000 Marker，凝胶浓度0.8％，上样40ul，电压50V，电泳30min。

图5为PCR产物第二次回收结果0.8％琼脂糖凝胶电泳图谱；其中，A：179bp，B：566bp，C：1485bp，M：DL2000 Marker，凝胶浓度0.8％，上样40ul，电压50V，电泳30min。